馬藺（Iris lactea）又名馬蓮,是鳶尾科鳶尾屬多年生的宿根草本植物,廣泛分布于全國各地。其根系十分發(fā)達、長勢旺盛、對環(huán)境適應性強是耐重金屬、抗旱、耐鹽堿的優(yōu)良觀賞地被植物。本研究以馬藺為研究材料,擬采用RACE技術(shù)獲得HMA2全長cDNA序列;利用原子吸收分光光度計和Real-time RT-PCR技術(shù)分別對不同濃度CdC12· 2.5H2O處理下其根及地上部的HMA2表達水平及Cd2+積累模式與變化規(guī)律進行分析;揭示其在低鎘（25 mg L-1 CdC12·2.5H20）或高鎘（150 mg L-1 CdC12.2.5H2O）處理不同時間（0-168 h）下馬藺IlHMA2表達模式時空變化規(guī)律。以馬藺根中總RNA為模板,采用RT-PCR方法獲得了重金屬ATP酶基因片段,以中間載體pHANNIBAL和植物表達載體pART27為基礎(chǔ),采用酶切和連接的方法,構(gòu)建了 CaMV35S啟動子驅(qū)動含有目的基因IlHMA2片段的反向重復序列表達載體pARTG1G2,并使用農(nóng)桿菌介導將此重組質(zhì)粒整合入農(nóng)桿菌GV3101,并轉(zhuǎn)入到馬藺幼苗體內(nèi)獲得了I萬HMA2-RNAi轉(zhuǎn)化株系。研究結(jié)果將為闡明... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學山西省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．］馬藺總ＲＮＡ的凝膠電泳??

上下無雜帶與目的片段一致（圖３．２）。經(jīng)測序得到??序列長度為２６５?ｂｐ。??Ｍｌ?１??■｜??（＆???２５０＾，?ＫＳＫＳｉ?２６５ｂＰ??Ｉ?ｆ?１?ｎｐ??圖３．２?／／Ｍ４２核心片段的ＰＣＲ凝膠電泳??Ｆｉｇ．?３．２?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｃｏｒｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??注：１：／／Ｍ４２片段ＰＣＲ產(chǎn)物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＨＭＡ２?ｆｒａｇｍｅｎｔ．??３．３?基因的３’ＲＡＣＥ擴增結(jié)果??以馬藺的３’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ為模板，用３’ＨＭＡ２?ＷＦ１與３＇ＨＭＡ２ＮＦ］引物進??行ＰＣＲ擴增，經(jīng)凝膠電泳檢測可知其外側(cè)ＰＣＲ產(chǎn)物并未出現(xiàn)目的條帶，而通過內(nèi)側(cè)ＰＣＲ??得到約為３０００?ｂｐ的ＤＮＡ目的擴增產(chǎn)物（圖３．３?），經(jīng)測序長度為２８９８?ｂｐ。??Ｍ２?１??５０００ｂｐ?ＫｊＫ－４?ｉ??一２８９８ｂｐ??１０００ｂｐ???７５０ｂｐ?——??５〇〇ｂｐ—－－—??２５０ｂｐ???ｌＯＯｂｐ???圖３．３?３’ＲＡＣＥ?ＰＣＲ的凝膠電泳??Ｆｉｇ．?３．３?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３’ＲＡＣＥ??注：１：３’ＲＡＣＥＰＣＲ?產(chǎn)物。??Ｎｏｔｅ：?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?３，ＲＡＣＥ??３．４?／／Ｍ４２基因的５＿ＲＡＣＥ擴增結(jié)果??以馬藺５’ＲＡＣＥ得到的ｃＤＮＡ為模板，使用５＇ＨＭＡ２?ＷＲ１與５’ＨＭＡ２ＮＦ１引物進??行巢式ＰＣＲ。經(jīng)凝膠電泳檢測

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【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]東南景天鎘超積累相關(guān)基因的克隆與功能研究[D]. 張敏.浙江大學 2011

碩士論文
[1]長穗偃麥草高親和K+轉(zhuǎn)運蛋白基因EeHKT1;4的克隆及對煙草遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 張琳.山西農(nóng)業(yè)大學 2015
[2]鳶尾屬（Iris L.）4種植物鎘（Cd）積累、耐性機理及影響因子研究[D]. 原海燕.南京農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：2922020