本文對'碭山酥梨'和'秋月'在內的88個品種進行石細胞含量的測定,然后以'碭山酥梨'和'秋月'雜交的110個F1代單株為作圖群體,采用GBS分子標記技術結合“擬測交”策略構建了分子遺傳圖譜,并通過KW法和ICIM法對控制梨果實石細胞性狀進行了 QTL定位研究。梨高密度遺傳圖譜的構建和果實石細胞QTL定位以及候選基因,為今后梨分子標記輔助育種提供了可靠的理論依據和方法材料,也為其遺傳育種及分子標記輔助選擇提供了有益的參考,對提高梨果實品質具有重要意義。主要結果如下:1以'碭山酥梨'和'秋月'在內的的88個梨品種資源為試材,利用冷凍分離法對成熟期的不同梨果實中的石細胞含量進行測定。結果表明:(1)88個梨品種的果肉石細胞含量平均值為0.227g,其變化范圍為0.032～1.024g,變異系數為76%。秋子梨品種果肉石細胞含量總體最高,種間雜交品種最低。(2)基于對梨果實中石細胞含量頻度分析,同時篩選出'六月酥'、'滿天紅'、'龍泉19'、'中1A3'、'豐水'等5個石細胞含量低的品種和'金川野生梨2號'、'白皮酥'、'紅香酥'、'八月酥'等4個石細胞含量高的品種。(3)對不同梨果實中石細胞含量的聚類分析,將所有的梨品種分為兩大類群,砂梨和白梨存在較近的親緣關系,秋子梨和種間雜交品種有共同特征。2通過對'碭山酥梨'和'秋月'及雜交F1代群體的果實石細胞含量進行測定,并進行聚類和頻率分析。聚類分析結果將112份材料分為父本類群和母本類群,頻率分析結果顯示作圖頻率分布基本接近正態(tài)分布,因此,此雜交后代群體適合作QTL定位。3利用'碭山酥梨'與'秋月'與的110株雜交F1代群體,以GBS分子標記方法構建梨的遺傳圖譜,構建了一張包含2600個標記位點的圖譜,共17個遺傳連鎖群,覆蓋了 1824.11 cM的遺傳距離,每個連鎖群的長度為0.26～1.14cM,平均長度為0.71 cM,每個連鎖群上平均分布153個位點。通過Joinmap5.0分析軟件基于構建的遺傳圖譜,結合F1群體果實石細胞含量的表型值,利用KW和ICIM法進行了 QTL定位分析,共檢測出16個QTL位點和2個重要區(qū)域。最后通過對16個位點延伸區(qū)域內基因以及與2個重要區(qū)域重疊區(qū)域內的基因進行KEGG和GO分析,找出了苯丙烷合成途徑,得到了 16個相關基因并篩選出3個候選基因。
【學位單位】：南京農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：S661.2
【部分圖文】：

０．８００；?１７：＞０．８００￣０．８５０；?１８：＞０．８５０￣０．９００；?１９：＞０．９００￣０．９５０；２０：＞０．９５０—?１．０００；２１＞１．０００??２．２不同品種的石細胞含量的聚類分析??梨果實中總石細胞含量的變化范圍是從０．０３２?ｇ到１．０２４ｇ?（圖１－３），平均值是??０．２２７?ｇ，變異系數為７６％。根據聚類分析結果（圖１－２），可將所有的梨品種分為兩??大類群。??第一大類分為砂梨、白梨兩大品系，其根據石細胞含量又細分為不同的亞群，即??砂梨Ｉ、砂梨ＩＩ、砂梨ＩＩＩ、砂梨ＩＶ和白梨Ｉ、白梨ＩＩ、白梨ＩＩＩ。砂梨品種共３７個，??石細胞含量的平均值為０．２２４?ｇ，變化范圍為０．０４６－１．０２４?ｇ?（圖１－３），變異系數為??８６．８５％；其中白梨品種共１８個，石細胞含量的平均值為０．２４９?ｇ，變化范圍為??０．０３２￣０．５６１ｇ?（圖?１－３），變異系數為?６６．１６ｇ。??砂梨品系Ｉ的石細胞含量區(qū)間為０．０４６？０．０６５?ｇ，共５個，如‘龍泉１９’，‘豐水’、??‘黃金梨’等；砂梨品系ＩＩ的石細胞含量區(qū)間為０．１０１？０．１４３?ｇ

的典型分布。通過果實石細胞含量的變異系數（０．７０５）可知被調査的群體個體間存在??著明顯的分離，均存在一定數量的超親類型，性狀在親本間具有一定的差異。??果實石細胞含量在群體中頻率分布見圖２－２所示，作圖頻率分布基本接近正態(tài)分??布，表明被調查的性狀受多基因控制，是典型的數量性狀，因而用此雙親構建群體有??可能獲得控制梨果實相關性狀的ＱＴＬ。??表２－２果實石細胞含量正態(tài)分布檢測??Ｔａｂｌｅ?４－１?Ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｎｏｒｍａｌ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｆｏｒ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?ｍａｐｐｉｎｇ?ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ??ｍｉ?ｉｉ?標準差?變異系數?５ｉｉ??Ｔｒａｉｔ?Ｍｅａｎ?ＳＤ?ＣＶ?（％）?Ｋｕｒｔｏｓｉｓ?Ｓｋｅｗｎｅｓｓ??石細胞含量?０．１５２?０Ａ０１?０．７０５?９．９８２?２．４３３??Ｍｂ??３（＾??〇?ｉ??將ｓ??遐?Ｉ?Ｊ??ｒ?＼??１?１?１?１?Ｍ?１?Ｉｒ＾ＬＪ—．—．??〇〇〇?〇?｜〇?０?２０?Ｏ?ｉＯ?０４０?０?５０?０．６０?０?７０?０８０??石細胞含量范圍?Ｒａｎｇｅ?ｏｆ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ??圖２－２?ＦＩ后代石細胞含量在群體中的頻率分布??Ｆｉｇ．２－２?Ｔｈｅ?ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔｏｎｅ?ｃｅｌｌ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＦＩ?ｉｎ?ｐ

１．２．２測序實驗??用干冰將提取的ＤＮＡ運輸至深圳華大基因科技服務有限公司，采用??ＩｌｌｕｍｉｎａＨｉＳｅａ２０００儀進行測序工作。具體建庫流程如圖４－１所示：首先將提取的ＤＮＡ??進行檢測，質量合格的進行樣品、ｂａｒｃｏｄｅ及接頭的準備及干燥；之后利用限制性酶??（ＲｅｓｔｒｉｃｔＥｎｚｙｍｅ，ＲＥ）?ＡｐｅＫＩ?（ＧＣＷＧＣ）消化?ＤＮＡ；消化后的?ＤＮＡ?片段兩端加接??頭（ａｄａｐｔｅｒ），其中一端的接頭含有ｂａｒｃｏｄｅ序列，另一端的接頭不含有ｂａｒｃｏｄｅ序列；??然后進行Ｐｏｏｌｉｎｇ和純化；純化后進行ＰＣＲ擴增，只有兩端接頭種類不同的片段以及??片段長度在１７０－３５０?ｂｐ之間的可被選擇性擴增；最后純化ＰＣＲ產物并將構建好的文??庫質檢合格后進行測序。??４．?Ｐｏｏｌ?ＤＮＡｓ?＆?Ｃｌｅａｎ?ｕｐ??６．?Ｃｌｅａｎ?ｕｐ?ＰＣＲ??１．?Ｐｌａｔｅ?ＤＮＡ?＆??ａｄａｐｔｅｒｐｌｆ?ｆ?＼??Ｍ?５．?Ｐｅｒｆｏｒｍ?ｆｅｌ?？，??２．?Ｄｉｇｅｓｔ?ＤＮＡ?ｗｉｔｈ?ＡｐｅＫＩ?７．?Ｅｖａｌｕａｔｅ??３．?Ｌｉｇａｔｅ
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本文編號：2880419