梨是薔薇科(Rosaceae),梨亞科(Romoideae),梨屬(Pyrus)多年生落葉喬木。我國是梨的主要起源中心,種質(zhì)資源非常豐富。傳統(tǒng)的鑒定方法對品種進(jìn)行鑒別已不能滿足需求,利用分子標(biāo)記技術(shù)從DNA水平對品種進(jìn)行鑒別更為便捷、可靠。SSR標(biāo)記呈共顯性遺傳、多態(tài)性高、重復(fù)性好。篩選帶型清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好的SSR核心引物,建立一套簡便、快速、可靠的梨品種鑒定技術(shù)體系應(yīng)用于梨品種鑒定,也有利于進(jìn)行品種權(quán)利保護(hù),維護(hù)育種者和生產(chǎn)者的利益,保障果樹產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。本試驗(yàn)利用來源于不同梨系統(tǒng)、遺傳背景差異較大的12份梨種質(zhì)資源對已報(bào)道的800對梨和蘋果的SSR引物及本課題組根據(jù)梨基因組數(shù)據(jù)開發(fā)的534對SSR引物進(jìn)行篩選,并利用篩選到的核心引物對125份主要的梨種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析和聚類分析,驗(yàn)證結(jié)果。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:1.梨SSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果:20μL PCR反應(yīng)體系中各成分濃度10×PCR Buffer(Mg~(2+))保持1倍濃度、dNTPs 0.2mmol/L,引物0.5μmol/L,模板DNA 2.5 ng/μL、Taq酶0.025 U/μL。2.篩選到25對清晰、穩(wěn)定、多態(tài)性高的引物,并在48份梨種質(zhì)資源中進(jìn)行驗(yàn)證,共檢測到387個(gè)等位基因,平均每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)15.48個(gè);多態(tài)性信息含量變幅為0.70~0.92,平均值0.85。聚類分析結(jié)果與種質(zhì)親緣關(guān)系吻合,表明這25對SSR引物可以作為梨品種鑒定的核心引物。3.構(gòu)建了124個(gè)梨栽培品種SSR特征指紋圖譜與分子身份證:25對SSR核心引物可以區(qū)分124個(gè)梨品種中除4組共9個(gè)品種以外的115個(gè)梨品種,共擴(kuò)增出了21個(gè)~69個(gè)基因型,按25個(gè)引物擴(kuò)增的基因型數(shù)目從多到少對SSR位點(diǎn)進(jìn)行排序,并利用Excel對供試品種進(jìn)行排序區(qū)分和數(shù)據(jù)背景顏色標(biāo)示,生成124份品種的SSR特征指紋數(shù)據(jù)表。對124個(gè)品種SSR特征指紋數(shù)據(jù)表前10個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型從00向99賦值編號,并依據(jù)各SSR位點(diǎn)在表中的順序?qū)⒕幪柎?lián)生成各品種的分子身份證號碼。4.對125份梨種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性分析:25對SSR引物在125份梨種質(zhì)材料中共檢測到453個(gè)等位基因,平均每個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增到18.12個(gè)等位基因。供試SSR引物檢測到基因型數(shù)目從21個(gè)~72個(gè)不等,平均每個(gè)SSR引物檢測到46.52個(gè)基因型。引物多態(tài)信息含量PIC值最小0.71,最大0.92,平均為0.85。聚類分析結(jié)果表明,125份梨品種資源總體上被分為東方梨和西洋梨2個(gè)類群。東方梨中白梨品種、砂梨品種、秋子梨品種和新疆梨品種及野生種杜梨聚在一起;西洋梨品種和來源于新疆的梨品種‘杜霞西’聚在一起,與種質(zhì)資源的親緣關(guān)系吻合,進(jìn)一步驗(yàn)證了核心引物鑒定的高效性。
【學(xué)位單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S661.2
【部分圖文】：

2.2.22 PCR 擴(kuò)增圖 2Fi增結(jié)果直觀分2. 1 部分梨品種igure 2.1 DNA分析種的基因組 DNelectrophoretogNA 瓊脂糖凝膠gram of some sa膠電泳圖amples

2.2.3利3 不同循環(huán)數(shù)利用上述確定Figure 2數(shù)對 SSR-P定的最佳組合圖 2. 2 梨 SSR2.2 ElectrophorPCR 擴(kuò)增結(jié)合，進(jìn)行循環(huán)R-PCR 正交優(yōu)化resis results of S結(jié)果的影響環(huán)數(shù)梯度試驗(yàn)化試驗(yàn)?zāi)z電泳SSR-PCR ortho響驗(yàn)，如圖 2.3，泳圖oronal designa、b、c、d分別為 25、30、35、

同退火溫溫度對 SSRFigR-PCR 擴(kuò)增圖 2. 3 不同gure 2.3 Effects增結(jié)果的影同循環(huán)數(shù)對 SSRs of cycle numb影響R-PCR 反應(yīng)體系ber different on系的影響SSR-PCR ampplification
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2875946