茭白(Zizania latifolia)是菰屬多年生宿根草本植物,是我國第二大水生蔬菜。不僅營養(yǎng)豐富,同時具有保健和藥用價值。在田間,茭白有正常茭白、灰茭及雄茭三種表型,這三種表型與黑粉菌在茭白體內(nèi)的生長狀態(tài)密切相關(guān)。目前,茭白種植主要采用茭墩分離篩選的方式,繁殖系數(shù)較低,速度慢、種質(zhì)資源少,同時繁殖過程受季節(jié)局限。生產(chǎn)上若連續(xù)兩年不選種,雄茭和灰茭的發(fā)生率將達30%左右,嚴重影響農(nóng)民的經(jīng)濟效益。本課題以“鄂茭1號”、“鄂茭2號”、“大別山1號”三種茭白品種為研究對象,通過研究不同基因型、不同外植體以及不同激素配比對愈傷組織的誘導(dǎo)及分化的影響來探討其離體再生情況。同時以“鄂茭1號”的雄茭幼苗為試驗材料,采用注射法接種菰黑粉菌,分子檢測接種株中黑粉菌情況,并在孕茭期調(diào)查統(tǒng)計接種株的孕茭情況。主要結(jié)果如下:1)不同基因型的茭白對愈傷組織的誘導(dǎo)率無明顯影響,差異不顯著。在進行單個重復(fù)實驗時,利用“鄂茭1號”作為試驗材料進行愈傷組織誘導(dǎo)的平均誘導(dǎo)率略高。2)“鄂茭1號”茭白不同外植體愈傷組織的誘導(dǎo)率差異顯著,其中側(cè)芽的平均愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于嫩葉和幼根。3)茭白側(cè)芽愈傷組織誘導(dǎo)激素配比的最佳組合為NAA 1 mg/L+6-BA 1mg/L+2,4-D 1 mg/L;茭白愈傷組織分化的最佳激素配比組合為6-BA 2 mg/L+NAA 1mg/L+KT 0.1 mg/L。4)注射法接種的植株有7.8%的植株能夠正常孕茭,其中105孢子/mL的黑粉菌孢子懸浮液效果最好。未能正常孕茭的植株,也有3.3%的植株檢測到黑粉菌的存在。5)利用石蠟切片法,對膨大后的正常茭白、雄茭以及接種成功的雄茭進行觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在同樣一個大小的視野內(nèi),接種成功的茭白生長點和膨大后的茭白生長點的細胞明顯比雄茭大,細胞與細胞之間的間隙也明顯比雄茭的大。綜上所述,本文研究了不同基因型、不同外植體類型及不同激素配比對茭白愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響,同時探討了菰黑粉菌注射法接種對茭白侵染及孕茭的影響,其研究結(jié)果為茭白的離體再生植株提供了理論依據(jù),對進一步探討菰黑粉菌與茭白之間的互作及茭白的孕茭機制研究具有重要意義。
【學(xué)位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S645.2
【部分圖文】：

.2 不同外植體對愈傷組織誘導(dǎo)的影響由表 3-7 可以看出，外植體類型不同，其愈傷組織的誘導(dǎo)率差異達到極顯著水，其中，側(cè)芽的愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于嫩葉和根的愈傷組織誘導(dǎo)率。以側(cè)芽作外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率為 86.11%，以嫩葉作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率為.67%，以根作為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率僅僅為 2.78%。以側(cè)芽作為外植體進行個重復(fù)實驗時，其誘導(dǎo)出的愈傷組織結(jié)構(gòu)緊密，顏色呈淡黃色，利于形成分化苗見圖 3-1）。表 3-7 不同外植體類型誘導(dǎo)愈傷組織的試驗結(jié)果Table 3-7 The results of different kind of explants外植體類型 平均誘導(dǎo)率（%） 5%差異 1%差異側(cè)芽 86.11 ± 0.21 a A幼嫩葉片 36.67 ± 0.17 b B根 2.78 ± 0.03 c C

圖 4-1 茭白黑粉菌 ITS-5.8S rDNA 序列擴增ig. 4-1 Amplification of ITS-5.8S rDNA of Ustilago esculeM, Marker; 1, 雄茭; 2, 正常茭白, Marker; 1, The male Zizania latifolia; 2, The white Zizan茭白雄茭植株孕茭的影響的雄茭植株，有 7.8%的植株能夠正常孕茭株均使雄茭正常孕茭（如圖 4-2）。提取未，PCR 擴增 ITS-5.8S rDNA 序列。瓊脂能擴增出 750 bp 左右的電泳條帶。104孢子/mL 的黑粉菌濃度下，接種成功率種成功率為 16.7%；106孢子/mL 的黑粉菌黑粉菌接種的最佳黑粉菌濃度為 105孢子表 4-3 黑粉菌接種后孕茭結(jié)果

圖 4-2 菰黑粉菌接種后的孕茭情況及檢測Fig. 4-2 Detection and pregnancy of Zizania latifolia after inoculation the Ustilago esculentaA, 雄茭; B, 正常茭孕茭; C, 未接種成功茭白; D-E, 接種成功的雄茭在葉片枯黃期孕茭; F, 分子檢測 （1, 雄茭2, 正常茭; 3, 接種未成功的雄茭; 4, 接種成功的雄茭）A, The male Zizania latifolia; B, The swollen white Zizania latifolia; C, Uninfected Zizania latifolia; D-E, Successfullyinfected Zizania latifolia; F, Molecular detection (1, The male Zizania latifolia; 2, The white Zizania latifolia; 3,Unsuccessful inoculation of male; 4, Successful inoculation of the male)4.2.3 接種株的石蠟切片分析取膨大的正常茭、雄茭及接種成功后的雄茭生長點經(jīng)固定、包埋、冰凍并切片等步驟處理后，顯微鏡觀察三種類型茭白在組織結(jié)構(gòu)上的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在顯微觀察的同樣一個視野內(nèi)，接種成功后的茭白生長點和膨大后的茭白生長點的細胞明顯比雄茭大，細胞與細胞之間的間隙也比雄茭的大（圖 4-3）。
【參考文獻】

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本文編號：2873041