發(fā)布時(shí)間：2020-10-22 20:50

　　 以藍(lán)果忍冬鮮食品種“邱雷姆”和“娜雷姆”為材料,以休眠芽萌發(fā)的帶芽莖段為外植體,通過初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)建立了組培快繁體系,以組培無菌苗的葉片、莖段為外植體,通過添加一種或多種生長調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)愈傷組織、誘導(dǎo)愈傷組織再生不定芽、誘導(dǎo)叢生芽生根建立離體植株再生體系,旨在為藍(lán)果忍冬的苗木快繁、資源保存、生物技術(shù)育種等奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)不同生長調(diào)節(jié)劑對兩個(gè)品種增殖培養(yǎng)的影響不同,兩品種適用的增殖培養(yǎng)基也不同,邱雷姆增殖系數(shù)較高的為處理2:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA,增殖系數(shù)為5.06,娜雷姆增殖系數(shù)較高的為處理7:3/4 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA增殖系數(shù)為5.3。(2)不同的生長調(diào)節(jié)劑對藍(lán)果忍冬葉片愈傷組織的誘導(dǎo)效果不同,單獨(dú)添加2,4-D(0.5-2 mg/L)可有效誘導(dǎo)藍(lán)果忍冬葉片產(chǎn)生愈傷組織,出愈率可達(dá)100%;單獨(dú)添加6-BA和TDZ并不能誘導(dǎo)藍(lán)果忍冬葉片產(chǎn)生愈傷組織;6-BA(1-2 mg/L)與2,4-D(0.2、0.5、1.0mg/L)配合使用可改善愈傷組織狀態(tài),使綠色致密型愈傷組織增加,愈傷量增多;添加6-BA、IBA、KT組合的三種生長調(diào)節(jié)劑,邱雷姆愈傷組織誘導(dǎo)率為60%-100%,娜雷姆誘導(dǎo)率稍低,為54%-95%,且愈傷量也表現(xiàn)為邱雷姆多余娜雷姆。三種添加方式相比較而言,6-BA與2,4-D組合誘導(dǎo)效果相對較好。(3)6-BA、IBA、KT三種生長調(diào)節(jié)劑中,IBA對兩個(gè)品系莖段愈傷組織誘導(dǎo)都有顯著影響,KT對娜雷姆莖段愈傷誘導(dǎo)有顯著影響,對邱雷姆莖段愈傷誘導(dǎo)無顯著影響,對邱雷姆而言,6-BA比KT的影響力大,6-BA和KT的F值分別為10.188和3.245。對娜雷姆而言,KT比6-BA的作用大,6-BA和KT的F值分別為20.663和33.027。娜雷姆莖段愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)為:MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+KT 1.0 mg/L,誘導(dǎo)率為77%,邱雷姆的莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 0.5 mg/L誘導(dǎo)率為98%。(4)6-BA、IBA、KT組合誘導(dǎo)愈傷組織時(shí),兩品種葉片誘導(dǎo)率大于莖段誘導(dǎo)率,葉片愈傷量小于莖段愈傷量,邱雷姆莖段誘導(dǎo)率為49%-98%,葉片誘導(dǎo)率為60%-100%,娜雷姆莖段誘導(dǎo)率為1%-77%,葉片誘導(dǎo)率為54%-95%。莖段和葉片都適合做誘導(dǎo)愈傷組織的外植體,邱雷姆的誘導(dǎo)效果好于娜雷姆。(5)細(xì)胞分裂素類在藍(lán)果忍冬愈傷組織的再生過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用,生長素類起輔助作用,邱雷姆KT的芽誘導(dǎo)效果顯著,好于6-BA,娜雷姆6-BA的誘導(dǎo)效果顯著,好于KT。邱雷姆KT、6-BA、IBA的F值依次為3.512(p0.05)、2.681(p0.05)、0.265(p0.05),娜雷姆KT、6-BA、IBA的F值依次為7.421(p0.01)、9.052(p0.01)、2.755(p0.05)。兩品種愈傷組織芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基均可用MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L,邱雷姆和娜雷姆不定芽再生頻率分別為83%和99%。(6)基本培養(yǎng)基和IBA是誘導(dǎo)生根的主導(dǎo)因素,且基本培養(yǎng)基的影響力大于IBA,NAA為次要因素。邱雷姆生根可選3/4 MS+0.5 mg/L IBA,娜雷姆生根可選:3/4 MS+1.0mg/L IBA。(7)適宜的暗處理時(shí)間可以縮短愈傷啟動(dòng)的時(shí)間,加快愈傷組織的生長。兩品系合適的暗處理時(shí)間均為15天。
【學(xué)位單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S663.9
【部分圖文】：

結(jié)果與分析.1 生長調(diào)節(jié)劑對藍(lán)果忍冬組培快繁的影響.1.1 初代培養(yǎng)經(jīng)過 75%乙醇浸泡 30 s（不時(shí)搖晃）→無菌水沖洗 3 次→0.1% HgCl2浸泡 6 min（不搖晃）→無菌水沖洗 6 次滅菌后，兩品種的污染率都很低或幾乎沒有污染。將兩個(gè)品種帶芽莖段接種在 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 8 天左右，腋芽開始萌，葉片開始張開（見圖 3-1-A）。初代培養(yǎng)一個(gè)月后兩個(gè)品種的無菌苗都長勢良好，出大量增殖（圖 3-1-C）。圖 3-1 展示了從接種到增殖的情況，說明邱雷姆，娜雷姆適用于獻(xiàn)中[37]。MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA 的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基，分化率都為 100%，芽苗壯，數(shù)量充足，可為后面試驗(yàn)提供很好的試驗(yàn)材料。

水平顯著差異，**表示 0.01 水平極顯著差異,下同表 3-3 娜雷姆增殖系數(shù)方差分析Tab.3-3 The ANOVE analysis result of Proliferation coefficienseⅢ型平方和Type III Sum ofSquares自由度Degree offreedom均方Mean SquareF 值F value 1.48 2 0.74 18.579** 0.531 2 0.265 6.663** 0.894 2 0.447 11.222** 0.797 20 0.04579.169 27

圖 3-7 愈傷組織再生Figure3-7 Callus regeneration 3 種生長調(diào)節(jié)劑對兩品系的愈傷組織再生頻率的影響來看，細(xì)組織的再生過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用，生長素類起輔助作用，邱雷好于 6-BA，娜雷姆 6-BA 的誘導(dǎo)效果顯著，好于 KT。兩品種用 MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L+KT 1.0 mg/L，邱雷姆和娜 83%和 99%。調(diào)節(jié)劑及培養(yǎng)基對叢生芽生根的影響織產(chǎn)生的叢生芽切分后轉(zhuǎn)入基本培養(yǎng)基、IBA、NAA 組合的 9養(yǎng) 30 天后觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表 3-18。生根率不同，同一處理不同品種生根率也不同。影響邱雷姆生本培養(yǎng)基>NAA，影響娜雷姆生根率的主次因素為：基本培養(yǎng)基差分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，基本培養(yǎng)基和 IBA 是誘導(dǎo)生根的主導(dǎo)因素， IBA，NAA 為次要因素。NAA 對邱雷姆生根無顯著影響（p>0雷姆生根（p<0.01）。根率均不太高（表 3-18），最高為邱雷姆處理 6 的 67%。娜雷
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本文編號：2852077