發(fā)布時間：2020-09-03 08:48

　　 目的:明確新疆紅棗縮果病和棗果黑斑病病菌主要種類及其生物學(xué)特性,同時對獲得的主要病原菌產(chǎn)生毒素的種類和含量進(jìn)行分析,并對病原菌毒素導(dǎo)致紅棗發(fā)病的機(jī)制進(jìn)行分析,為新疆紅棗黑斑病的防治提供依據(jù)。方法:從新疆主要紅棗種植區(qū)采集典型棗縮果病和棗果黑斑病病果實樣品,進(jìn)行分離、純化,并離體測定各分離菌株的致病性。采用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)(rDNA-ITS、EF-1α、β-tubulin和Actin序列分析)相結(jié)合的方法對主要病原菌進(jìn)行鑒定,確定病原菌種類,篩選出差異較大的代表菌株。采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測代表菌株主要毒素種類及含量,并對病原物粗毒素致病機(jī)理進(jìn)行研究。結(jié)果:1、從新疆紅棗主要種植區(qū)哈密、阿克蘇和巴音郭楞蒙古自治州分別采集紅棗縮果病樣品95份和棗果黑斑病樣品77份。從縮果病樣品中分離獲得90株分離物,從棗果黑斑病樣品中分離獲得49株分離物。在139株分離物中,鏈格孢菌131株,占94.25%;鐮刀菌6株,占4.32%;青霉菌2株,占1.44%。將分離物離體接種健康棗果,進(jìn)行致病性測定,僅鏈格孢屬菌可致棗果發(fā)病,說明鏈格孢菌是這兩種病害的主要致病菌。2、通過代表菌株形態(tài)學(xué)鑒定,再結(jié)合18S rDNA-ITS、EF-1α和、β-tubulin和Actin四個基因的序列分析,最后將縮果病原菌和黑斑病菌鑒定為交鏈格孢菌Alternaria alternata(Fries)Keissle。3、采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測10株交鏈格孢菌(A.alternata)代表菌株的4種主要鏈格孢菌毒素:鏈格孢酚(alternariol,AOH)、交鏈格孢酚單甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交鏈孢烯(altenuene,ALT)和細(xì)交鏈格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)。研究結(jié)果表明TeA、ALT、AME和AOH在不同發(fā)病程度棗果和人工接種條件下均有檢出,其中TeA檢出含量最高,范圍為3.1×103-5.5×103mg/kg;AME、AOH和ALT的含量范圍分別為0.6-6.4×102mg/kg,1.2-3.8×102mg/kg和0.09-5.08mg/kg。試驗證明這兩種病害的主要致病菌交鏈格孢菌(A.alternate)均可產(chǎn)生鏈格孢菌毒素,且產(chǎn)毒量高,危害嚴(yán)重,患病棗果無法安全食用,極大地影響了新疆紅棗的產(chǎn)量及商品價值。4、通過交鏈格孢菌粗毒素對棗葉葉綠素含量、細(xì)胞膜透性、酶活、可溶性糖含量的影響進(jìn)行致病機(jī)理研究。結(jié)果表明鏈格孢菌粗毒素處理棗葉后,葉綠素a含量無顯著變化,葉綠素b、葉綠素總量均降低,其中代表菌株為菌株hm-35,hm-24;棗葉電解質(zhì)滲漏,細(xì)胞膜透性隨處理時間的延長而增強(qiáng),電導(dǎo)率增強(qiáng)了一倍,棗葉細(xì)胞壁受到破壞;CAT、POD作為具有清除活性氧作用的防御酶,酶活顯著降低,細(xì)胞內(nèi)活性氧積累,細(xì)胞組織受到破壞;MDA活性降低,菌株92-3-1活性最低,為5.54U/mgprot,活性氧降低,起補(bǔ)償作用;蔗糖、果糖和葡萄糖含量,大部分菌株均有小幅度增大,可溶性糖含量均增長,且增長幅度大,表明呼吸作用增強(qiáng),營養(yǎng)物質(zhì)發(fā)生消耗。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：S436.65
【部分圖文】：

哈密地區(qū)第十三師火箭農(nóng)場縮果病 13 10 0 3黑斑病 10 9 0 1巴州第二師 21 團(tuán)縮果病 3 3 0 0黑斑病 13 13 0 0巴州第二師 27 團(tuán)縮果病 4 4 0 0黑斑病 7 6 1 0巴州第二師 30 團(tuán) 縮果病 12 12 0 0巴州第二師 31 團(tuán) 縮果病 17 17 0 0巴州第二師 33 團(tuán) 縮果病 12 12 0 0巴州第二師 34 團(tuán) 縮果病 20 19 0 1阿克蘇地區(qū)第一師6 團(tuán)縮果病 9 7 1 1黑斑病 19 19 0 0合計 139 131 2 6

.2 致病性測定結(jié)果由圖 2-2 可見，棗果接種鏈格孢菌 5d 后，接種部位開始出現(xiàn)水漬狀黑色圓形病斑，后逐漸擴(kuò)大，變硬，棗果內(nèi)部果肉分離，后期發(fā)病部位凹陷，整個果實爛。從棗縮果分離得到的致病菌引起與黑斑病菌相似癥狀，且離體接種棗果不現(xiàn)象。鏈格孢菌 33T11L、hm-32、hm-24、21-HB、34T11L、hm-36、hm-41、h-60、hm-35、hm-62、30-HB 等 18 株代表菌株菌引起紅棗果實發(fā)病，但鐮刀株 48T3L-hb 和 53T17L-S 接種棗果后未發(fā)病，因此可以判斷新疆紅棗縮果病和病的致病菌主要是鏈格孢菌。根據(jù)科赫氏法則，從發(fā)病病斑可重新分離得到相菌，而對照未分離得到任何病原菌。3 小結(jié)圖 2-2 棗果黑斑病和縮果病病原菌接種癥狀Fig.2-2 Symptoms of jujube black spot and fruit shrink disease after inoculation with the pathog注：A.CK；B.縮果病接菌癥狀；C.縮果病接菌癥狀剖面；D.黑斑病接菌癥狀otes：A.CK；B. Symptom of inoculation with fruit shrink disease pathogen；C. the section of Symptom of inoculawith fruit shrink disease pathogen；D. Symptom of inoculation with jujube black spot disease pathogen

罕分支，淡褐色至褐色，隨著連續(xù)產(chǎn)孢作合軸式分支，33.0-75.0×4.0-5.5μm。分生孢子單生或鏈生，倒棍棒形，卵形，倒梨形或近橢圓形，淡褐色至褐色，表面光滑，具3-8個橫膈膜，1-4個縱膈膜，分隔出略隘縮，孢身22.5-40.0×8.0-13.5μm（圖3-1 E-F)。依據(jù)菌落特征、分生孢子梗、分生孢子特征和參照文獻(xiàn)[54]，初步鑒定為A. alternata。3.2.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果采用ITS、β-tubulin、ACT和EF-1α對病原菌分別擴(kuò)增，得到大小約為500bp、800bp、圖 3-1 病原菌菌落形態(tài)及分生孢子形態(tài)Fig.3-1 Morphology of pathogen colony and conidia注：A. PDA 上正面菌落形態(tài)；B-C. PDA 上背面菌落形態(tài)；D. 分生孢子梗形態(tài)；E. 分生孢子鏈 S；F. 分生孢子形態(tài)Notes: A. The face modality of A. alternata on the PDA；B-C. The back modality of A. alternata on the PDA；D. Themorphology of the meristem；E. Sporulation pattern of A. alternata；F. Conidia of A. alternata

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2811218