【摘要】：本論文為了探索韌皮部mRNA遠距離傳遞機制,和FT mRNA移動的可能性,構(gòu)建了35S::PtFT:GFP,35S::PtFT:GFP:tRNA22和35S::PtFT:tRNA22超表達載體,以野生型番茄分別與超表達PtFT:GFP,PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄進行嫁接,以GFP熒光示蹤研究FT的傳導(dǎo)能力、方向、途徑和分配規(guī)律;通過在PtFT和PtFT:GFP基因序列后面加tRNA22,來研究改造的FT mRNA在促進轉(zhuǎn)基因植株成花能力上有增強。主要研究結(jié)果如下:(1)對實驗室前期克里曼丁/早實枳種間嫁接組合轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析,篩查到1073個可移動的mRNA,從中挑取了61個基因進一步驗證。根據(jù)候選基因目標(biāo)SNP附近PCR擴增產(chǎn)物測序分析,有15個mRNA分子移動獲得證實,其中8個mRNA由接穗向砧木移動,有5個mRNA由砧木向接穗移動,有2個mRNA發(fā)生雙向移動。(2)通過利用PlaMoM(Plant Mobile Macromolecules)TLS finder在線分析工具(http://www.systembioinfo.org/plamom/),對檢測發(fā)現(xiàn)的mRNA的TLS類似結(jié)構(gòu)進行了掃描,發(fā)現(xiàn)向上移動和向下移動的mRNA中分別有8.6%和14.9%具有發(fā)夾結(jié)構(gòu),說明含有TLS類似結(jié)構(gòu)的基因可能有利于mRNA移動或移動過程的穩(wěn)定性。(3)構(gòu)建了35S::PtFT:GFP、35S::PtFT:GFP:tRNA22和35S::PtFT:tRNA22超表達載體,分別轉(zhuǎn)化番茄,獲得了超表達陽性株系,從DNA水平和RNA水平進行陽性檢測,結(jié)果表明外源基因已經(jīng)成功整合到番茄的基因組中。(4)對轉(zhuǎn)基因株系進行表型觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型番茄相比,PtFT:GFP和PtFT:tRNA22超表達番茄都表現(xiàn)出早花現(xiàn)象,而PtFT:GFP:tRNA22超表達番茄沒有表現(xiàn)出明顯的早花現(xiàn)象。這表明PtFT:GFP和PtFT:tRNA22基因的超表達均可以促進番茄的早花。(5)將野生型番茄分別嫁接到超表達PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄上,利用熒光顯微鏡研究PtFT:GFP:tRNA22在蛋白質(zhì)水平的移動,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在野生型接穗中嫁接口上1cm處檢測到熒光信號,在嫁接口上4cm處熒光信號消失,說明PtFT:GFP:tRNA22基因可以在蛋白質(zhì)水平發(fā)生移動。但在接穗部位未檢測到外源PtFT mRNA,表明外源PtFT:GFP:tRNA22和PtFT:tRNA22的mRNA未能在砧穗間移動。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S666
【圖文】：

圖 1.1 NCAP 機制（Roberto,2004）Fig.1.1 The mechanism of NCAP年來隨著研究的深入，研究者發(fā)現(xiàn)韌皮部 mRNA 遠距離運輸還與 端 UTR 莖環(huán)發(fā)夾結(jié)構(gòu)以及 5’端富含 CU 的原件有關(guān)（Mahajan et al 種特殊結(jié)構(gòu)的 mRNA 能和一些特定的蛋白質(zhì)相互識別結(jié)合形成 RNA從而協(xié)同 RNA 在韌皮部中的長距離運輸。Li 等人首先在南瓜韌皮汁 結(jié)合蛋白 CmRBP50 可以在南瓜韌皮汁液中結(jié)合形成核糖核蛋白（Li 以與 mRNA 5’端的 CU 結(jié)構(gòu)相互結(jié)合從而協(xié)同其在韌皮部的遠距離、GAIP、GAIP-B、SCL14P 和 STMP 等。之后作者利用體外 Pulldown Bpso 可以與 Cmppl6、GTPbP 及 PsPL 等 5 個韌皮部蛋白在體外發(fā)生梨中一共克隆出 12 個 Wox 基因，其中 PbWoxT1 可以在伴胞中和 P成 RNP 復(fù)合體，使 PbWoxT1 傳遞量和傳遞效率得到提高，從而調(diào)控樹木發(fā)育（Duan et al 2016）。有研究表明在馬鈴薯中一共有 6 個 StP StPTB1 和 StPTB6 與南瓜中的 PTB 蛋白同源性最高。StPTB 和 StPT

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文物病毒 tRNA 類似結(jié)構(gòu)研究進展NA 簡介A 是一類不編碼蛋白質(zhì)，長度一般為 71 至 94 bp 的小分子核糖核酸，酸轉(zhuǎn)運到特定的位置，以 mRNA 為模板合成蛋白質(zhì)。由于 tRNA 比較 1965 年人們就測出了第一個 tRNA，測序結(jié)果表明該 tRNA 序列主要G 四種核苷酸組成。隨著測序技術(shù)的發(fā)展，更多的 tRNA 被測出來，構(gòu)和三葉草模型逐漸被揭示，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大多數(shù)的 tRNA 分子都可以形。它由 3 個環(huán)，四個莖，以及可變臂構(gòu)成。3 個環(huán)是指 D 環(huán)、反密碼四個莖是指 D 莖、反密碼莖、TΨC 莖和氨基酸接受莖，可變臂在 TΨ莖之間。之后研究者利用 X 射線晶體衍射法，tRNA 的三維結(jié)構(gòu)被揭A 的三維結(jié)構(gòu)像倒寫的英文字母 L，因此又稱 L 型結(jié)構(gòu)（如圖 1.2）。

Rietveld 等（1982）提出的 TYMV RNA級結(jié)構(gòu)模型ndary structure of the tRNA-like fragment of fication and enzymatic digestion by Rietveld 質(zhì)的 mRNA 可以通過韌皮部移動到植揮作用。近年來，很多研究發(fā)現(xiàn)韌究很少關(guān)注到是什么引發(fā) mRNA 移翻譯成蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的潛力。2009 tRNAs 富集，說明很多 tRNA 有選擇者猜測 tRNA 類似結(jié)構(gòu)可能是真正促解決這些問題，Zhang 等人在 DCM1的轉(zhuǎn)錄物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些 mRNA 在韌對嫁接植物進行表型觀察以及酶測定從轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)移到野生型的葉，也這些 mRNA 分子在運輸后可以被翻譯

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 牛自勉,李全,郜曉夢,張忠仁;SDC系蘋果矮化砧木生長、結(jié)果及抗逆性的研究[J];果樹科學(xué);1994年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 余丹;PtFT基因不同轉(zhuǎn)錄本異位表達表型鑒定及嫁接信號轉(zhuǎn)移[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2797969