【摘要】：本次課題的研究對(duì)象——生姜具有多種功效,不僅可以作為藥用,而且還有發(fā)汗、溫胃、潤(rùn)肺止咳、解毒等作用。但是隨著我國(guó)生姜出口需求量的增加,在生姜栽培的過程中,容易感染以青枯菌為首的病害,姜瘟病嚴(yán)重的影響了我國(guó)生姜的品質(zhì),造成了大量生姜田地的絕收。姜瘟病病原主要是由青枯假單胞桿菌引起。目前在姜瘟病防治上主要采用物理、化學(xué)和生物防治,最常用的生物防治方法主要是通過篩選有效的拮抗菌,在生姜根莖部定殖對(duì)姜瘟病具有限制作用的有益菌株。但是目前的生物防治并沒有良好方法應(yīng)用于生產(chǎn),為進(jìn)一步尋求有效的防治方法,本次試驗(yàn)進(jìn)行了拮抗青枯菌的篩選和鑒定。為獲得良好的防治姜瘟病的方法,產(chǎn)生與擴(kuò)大生姜的產(chǎn)量,筆者在結(jié)合前人研究的經(jīng)驗(yàn)根本之上,擬安徽省生姜種植區(qū)的發(fā)病植株根際和健康姜的根際土中分離和篩選對(duì)姜瘟青枯菌有拮抗作用的根際促生菌,在對(duì)其拮抗性質(zhì)進(jìn)行初步研究的基礎(chǔ)上,連系形態(tài)、培養(yǎng)特性,生理生化特征的鑒定以及16SrRNA的種屬特異性序列分析等方法,對(duì)篩選到的拮抗菌株進(jìn)行分類鑒定,從而對(duì)姜瘟病的生物防治提供經(jīng)濟(jì)有效的功能型菌株,為姜瘟病防治上奠定一定的理論基礎(chǔ),主要研究如下:(1)通過稀釋涂布平板法于高氏、解磷和固氮三種選擇性培養(yǎng)基上篩選和分離拮抗菌,最終于固氮培養(yǎng)基中篩選到兩株拮抗菌,分別為N3和N5。隨后將兩株固氮拮抗菌進(jìn)行生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)以檢測(cè)其拮抗能力,發(fā)現(xiàn)N3菌株對(duì)姜瘟病具有較好的拮抗效果,拮抗能力為二級(jí),能夠有效的抑制姜瘟病青枯致病菌的發(fā)育生長(zhǎng);而N5菌株對(duì)姜瘟病青枯病的拮抗效果一般,拮抗能力為一級(jí),較N3菌株拮抗姜瘟病效果弱。(2)將篩選到的固氮菌株N3和N5進(jìn)行形態(tài)特征以及生理生化特性的鑒定,通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):產(chǎn)吲哚乙酸上,N3菌株總體產(chǎn)吲哚乙酸高于N5菌株,在姜瘟病拮抗菌中定植于生姜中,可以較N5菌株更好的促進(jìn)植物生長(zhǎng);在溶磷能力上,N3菌株總體溶磷活力相對(duì)高于N5菌株,拮抗于生姜中可以更好的融合土壤中磷離子結(jié)合形成化合物,不易流失,預(yù)防土壤病害;在產(chǎn)鐵載體能力上,N3菌株總體產(chǎn)鐵載體能力也略高于N5菌株,可以很好的結(jié)合鐵色素供給給微生物細(xì)胞中低分子量的物質(zhì),有效促進(jìn)植物吸收土壤中微生物。(3)將N3和N5菌株進(jìn)行分子鑒定,通過SDS-K法提取總DNA,通過電泳檢測(cè)并且進(jìn)行細(xì)菌的基因序列擴(kuò)增,最終得到1500bp的擴(kuò)增條帶,并且通過測(cè)序鑒定N3和N5菌株分別是節(jié)桿菌和伯克氏菌。
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S436.32;S476
【圖文】：

４結(jié)果與分析逡逑４．１拮抗菌的抑菌能力逡逑分離所篩選到的總菌株的數(shù)量，形狀等情況，如下圖４－１。逡逑數(shù)量逡逑篩選得到的菌株數(shù)逡逑４００邋—邐邐邐ｒ－｜邐—邐逡逑３５０邋￣￣ｒ—￣ｊ＇…—－邐逡逑ＩＺ邋：廣二．．一＝．．．．．．－．－Ｉ邋＝ＺＴ＝￣７１：＝．．：二：．：－邐逡逑２0Ｑ邋－Ｉ邐Ｊ；邐邐邋Ｉ邋■菌株數(shù)Ｉ逡逑１５０邋－■邐ｒｒ￣ｒ邐ｍ－邐ｒｎ邐■邐邐邐—＇邐＾逡逑５０邋－１—＇邋邐—邋ｆ邐ｒ．邋－邐邐逡逑0邐ｒ邋邋ｉ邐‘邐邐邐％邋；邋ｌ＂；邋＂：邋－１邐？■■■—■■—逡逑１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－２邋１０－３逡逑解磷邐高氏邐固氮邐完全逡逑邐邐邐１濃度逡逑圖４－１篩選總菌株數(shù)分布圖逡逑Ｆｉｇ．４－１邋ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ邋ｔｏｔａｌ邋ｓｔｒａｉｎ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｍａｐ逡逑結(jié)合圖４－１能夠看出，選擇性培養(yǎng)基中高氏培養(yǎng)基總體涂布得到的菌株數(shù)逡逑最多，固氮居第二，再對(duì)得到的菌株進(jìn)行復(fù)篩，于固氮培養(yǎng)基中篩選到兩株具有逡逑透明抑菌圈的菌株，證明姜瘟病的青枯菌能夠被這兩種菌株抑制生長(zhǎng)，但是這兩逡逑種菌株的抑菌圈大小不同，其拮抗能力也存在差異，如下圖４－２，分別編號(hào)為固逡逑氮３邋（左）、固氮５邋（右）。逡逑圖４－２具有拮抗性質(zhì)的固氮菌（左Ｎ３，右Ｎ５）逡逑Ｆｉｇ．邋４－２邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ邋ｆｉｘｉｎｇ邋ｂａｃｔｅｒｉａ邋ｗｉｔｈ邋ａｎｔａｇ

４結(jié)果與分析逡逑４．１拮抗菌的抑菌能力逡逑分離所篩選到的總菌株的數(shù)量，形狀等情況，如下圖４－１。逡逑數(shù)量逡逑篩選得到的菌株數(shù)逡逑４００邋—邐邐邐ｒ－｜邐—邐逡逑３５０邋￣￣ｒ—￣ｊ＇…—－邐逡逑ＩＺ邋：廣二．．一＝．．．．．．－．－Ｉ邋＝ＺＴ＝￣７１：＝．．：二：．：－邐逡逑２0Ｑ邋－Ｉ邐Ｊ；邐邐邋Ｉ邋■菌株數(shù)Ｉ逡逑１５０邋－■邐ｒｒ￣ｒ邐ｍ－邐ｒｎ邐■邐邐邐—＇邐＾逡逑５０邋－１—＇邋邐—邋ｆ邐ｒ．邋－邐邐逡逑0邐ｒ邋邋ｉ邐‘邐邐邐％邋；邋ｌ＂；邋＂：邋－１邐？■■■—■■—逡逑１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－３邋１０－４邋１０－５邋１０－２邋１０－３逡逑解磷邐高氏邐固氮邐完全逡逑邐邐邐１濃度逡逑圖４－１篩選總菌株數(shù)分布圖逡逑Ｆｉｇ．４－１邋ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ邋ｔｏｔａｌ邋ｓｔｒａｉｎ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｍａｐ逡逑結(jié)合圖４－１能夠看出，選擇性培養(yǎng)基中高氏培養(yǎng)基總體涂布得到的菌株數(shù)逡逑最多，固氮居第二，再對(duì)得到的菌株進(jìn)行復(fù)篩，于固氮培養(yǎng)基中篩選到兩株具有逡逑透明抑菌圈的菌株，證明姜瘟病的青枯菌能夠被這兩種菌株抑制生長(zhǎng)，但是這兩逡逑種菌株的抑菌圈大小不同，其拮抗能力也存在差異，如下圖４－２，分別編號(hào)為固逡逑氮３邋（左）、固氮５邋（右）。逡逑圖４－２具有拮抗性質(zhì)的固氮菌（左Ｎ３，右Ｎ５）逡逑Ｆｉｇ．邋４－２邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ邋ｆｉｘｉｎｇ邋ｂａｃｔｅｒｉａ邋ｗｉｔｈ邋ａｎｔａｇ

所得到的拮抗固氮菌Ｎ３、Ｎ５的抑菌圈大小等記錄如下圖４－３、表４－１。逡逑１１Ｌ邋Ｊ逡逑圖４－３抑制試驗(yàn)逡逑Ｆｉｇ．邋４－３邋ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ邋ｔｅｓｔ逡逑表４－１姜痕病拮抗菌的拮抗能力逡逑Ｔａｂｌｅ邋４－１邋Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ邋Ａｂｉｌｉｔｙ邋ｏｆ邋Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ邋Ｂａｃｔｅｒｉａ邋ｏｆ邋ｇｉｎｇｅｒ邋ｂｌａｓｔ逡逑拮抗菌邐抑菌圈寬度Ｒ１邋菌落半徑Ｒ２邐Ｒ１／Ｒ２邐拮抗能力逡逑（ｃｍ）邐（ｃｍ）逡逑Ｎ３邐０．６邐０．５５邐１．０９邐＋邋＋逡逑Ｎ５邐０．４邐０．５邐０．８邐＋逡逑結(jié)合表４－１可以看出，所篩選到的２株姜瘟病的拮抗固氮菌，Ｎ３菌株對(duì)姜逡逑瘟病具有較好的拮抗效果，其抑菌圈的寬度為0．６ｏｎ，Ｒ１／Ｒ２為１．０９，拮抗能力逡逑為二級(jí)，能夠有效抑制姜瘟病青枯致病菌的生長(zhǎng)；而Ｎ５菌株對(duì)姜瘟病青枯病的逡逑拮抗效果一般，其抑菌圈寬度是0．４ｃｍ，Ｒ１／Ｒ２為０．８，拮抗能力為一級(jí)，較Ｎ３逡逑菌株拮抗姜瘟病效果弱。逡逑４．２拮抗菌的生理生化指標(biāo)逡逑４．２．１吲哚乙酸濃度逡逑用Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ邋’邋ｓ反應(yīng)法于紫外分光光度計(jì)下測(cè)得數(shù)值，并繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線如逡逑下圖４－４。逡逑１８逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2796108