發(fā)布時(shí)間：2020-08-12 17:54

【摘要】：以'新球蜜荔'和'大丁香' 2個(gè)荔枝品種胚性愈傷組織為材料,研究了'新球蜜荔'(XQTD)和'大丁香'(DDXTD)接種在 TD(MS+O.1 mg/L NAA+0.5 mg/L TDZ+0.1 g/L 肌醇+0.4 g/L 水解乳蛋白(LH)+100 ml/L 椰汁+60 g/L 蔗糖+10 g/L瓊脂)培養(yǎng)基與'新球蜜荔'接種在TX(MS+0.1 mg/L NAA+5 mg/L ZT+0.1 g/L 肌醇+0.4 g/L 水解乳蛋白(LH)+100 ml/L 椰汁+60 g/L 蔗糖+10 g/L瓊脂)培養(yǎng)基(XQTX)上各培養(yǎng)物體胚發(fā)生過(guò)程中的組織細(xì)胞學(xué)、抗氧化酶與多胺氧化酶活性、內(nèi)源激素、主要糖代謝相關(guān)組分、酶活性及其基因表達(dá)的變化。主要結(jié)果如下:1.XQTD從6 d開(kāi)始變褐,9 d時(shí)觀察到球狀凸起,石蠟切片中觀察到球形胚結(jié)構(gòu),12～21 d時(shí)觀察到球形胚、心形胚和魚(yú)雷形胚等不同形態(tài)體胚；而DDXTD從9 d開(kāi)始逐漸變褐,15～21 d時(shí)石蠟切片中能看到少量的球形胚和心形胚。XQTX在第12 d時(shí)觀察到有完整原形成層的球形胚,21 d時(shí)石蠟切片中觀察到子葉形胚。2個(gè)荔枝品種的體胚發(fā)生過(guò)程中都觀察到內(nèi)起源和外起源兩種起源方式,體胚發(fā)生均為單細(xì)胞起源,都經(jīng)歷了球形胚、心形胚、魚(yú)雷形胚和子葉形胚等相似的發(fā)育過(guò)程。2.XQTX、XQTD和DDXTD的可溶性蛋白含量變化都呈單峰曲線,峰值出現(xiàn)在第6 d,9 d～12 d時(shí),XQTD與XQTX的蛋白含量積累回升,而DDXTD沒(méi)有。三者的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性與過(guò)氧化氫酶(CAT)活性都變化類(lèi)似且差異不大。三者的過(guò)氧化物酶(POD)活性變化都呈先升后降,而DDXTD在培養(yǎng)過(guò)程中都高于XQTD與XQTX。三者的多胺氧化酶(PAO)活性變化都呈先降后升,在體胚發(fā)生時(shí)期0 d～6 d里,DDXTD的PAO活性下降幅度低于XQTD,且在培養(yǎng)過(guò)程中DDXTD的PAO酶活性也低于XQTD。3.XQTX、XQTD和DDXTD中生長(zhǎng)素(IAA)含量變化都呈先升后降,在培養(yǎng)中DDXTD都遠(yuǎn)高于XQTD與XQTX,DDXTD與XQTD的峰值都出現(xiàn)在第6 d,而XQTX出現(xiàn)在第12 d。XQTD與XQTX的激動(dòng)素(KT)含量基本不變,而DDXTD則呈稍微上升,并DDXTD高于XQTD與XQTX。XQTD與DDXTD的玉米素(ZT)含量變化基本不變,XQTX的ZT含量變化呈先升后降,在培養(yǎng)前期遠(yuǎn)高于XQTD,但三者的ZT在培養(yǎng)后期含量都較低,但DDXTD最低。XQTD與XQTX的水楊酸(SA)含量變化都呈先升后降,而DDXTD呈緩慢上升,三者的SA含量在培養(yǎng)前期都較低,不過(guò)XQTD在培養(yǎng)第15 d出現(xiàn)一個(gè)高峰,并高于DDXTD與XQTD,而XQTX與DDXTD仍處于低水平。XQTD與DDXTD的赤霉素(GA3)含量都呈不斷下降,XQTX呈先降后升,不過(guò)在培養(yǎng)18 d前,XQTX都低于XQTD,隨后XQTX反超XQTD,而DDXTD在0 d時(shí)高于XQTD,但其余時(shí)間兩者含量相近。三者的乙烯釋放量在培養(yǎng)過(guò)程中變化都不大,且保持在低水平。4.XQTD與XQTX的淀粉含量都下降,而XQTD高于XQTX,但在培養(yǎng)第18 d時(shí)XQTX淀粉含量上升,并高于XQTD,DDXTD的淀粉含量先降后升再降,從培養(yǎng)第9 d開(kāi)始就高于XQTD。XQTD與XQTX的蔗糖含量先升后降,兩者的峰值都出現(xiàn)在第6 d,不過(guò)XQTX高于XQTD,DDXTD的蔗糖含量先升后降再升,并在培養(yǎng)6 d到12 d中都低于XQTD。XQTX、XQTD和DDXTD的葡萄糖和果糖含量都持續(xù)上升,且XQTD與XQTX的葡萄糖與果糖含量在培養(yǎng)中都相近,但在培養(yǎng)第18 d時(shí)XQTD高于XQTX,而DDXTD則是在培養(yǎng)0 d到15 d中都高于XQTD。5.XQTD與DDXTD的中性轉(zhuǎn)化酶(NI)活性變化整體都呈下降,XQTX呈先升后降,且XQTD的NI活性在培養(yǎng)過(guò)程中都低于DDXTD和XQTX,而XQTD的酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)活性變化呈不斷上升,DDXTD呈先降后升,XQTX呈不斷下降,并且從培養(yǎng)9 d開(kāi)始,XQTD的AI活性都高于DDXTD和XQTX。而三者各自的NI基因與AI基因表達(dá)規(guī)律相似,XQTD與XQTX都呈先升后降,而DDXTD呈不斷上升,且NI基因表達(dá)與酶活性呈正相關(guān),而AI基因表達(dá)不與酶活性呈正相關(guān)。三者的蔗糖合酶(SS)活性變化都呈先升后降,不過(guò)XQTX與DDXTD在培養(yǎng)后期都有所回升,但XQTD都高于XQTX與DDXTD。XQTD與DDXTD的SS基因表達(dá)規(guī)律差異較大,而XQTD與XQTX的SS基因表達(dá)規(guī)律相似,且XQTD與DDXTD的SS基因表達(dá)不與酶活性呈正相關(guān),而XQTX則呈正相關(guān)。三者的β-淀粉酶活性變化相似都呈先升后降,與總淀粉酶活性變化相似,且在培養(yǎng)后期以XQTX最高,XQTD次之,DDXTD最低。而XQTD與XQTX的α-淀粉酶活性變化整體呈上升,而DDXTD呈先降后升再降。三者的α-淀粉酶基因表達(dá)都是培養(yǎng)前期高,后期低,而XQTD與DDXTD的β-淀粉酶基因表達(dá)則是培養(yǎng)后期高于前期,XQTX仍是前期高,后期低。不過(guò)DDXTD的β-淀粉酶基因表達(dá)在第18 d時(shí)遠(yuǎn)高于XQTD。且α-淀粉酶與β-淀粉酶基因表達(dá)都不與酶活性呈正相關(guān),可能存在翻譯后調(diào)控。而β-淀粉酶活性更能反映出總淀粉酶活性。綜上所述,本研究觀察了'新球蜜荔'和'大丁香'體胚發(fā)生過(guò)程差異,二者體胚起源均為單細(xì)胞起源。高的POD活性和高的IAA、KT、GA3含量更有利于胚性愈傷增殖,而培養(yǎng)物中較高的PAO活性、較高的ZT及SA含量更有利于體胚的發(fā)生。糖代謝與體胚發(fā)生關(guān)系密切,培養(yǎng)物中高蔗糖含量、后期較低的淀粉含量有利于體胚發(fā)生,這些糖組分含量的變化與蔗糖轉(zhuǎn)化酶、蔗糖合酶、淀粉酶等活性相關(guān),但與編碼這些酶的基因表達(dá)相關(guān)性不強(qiáng),具體原因需進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S667.1
【圖文】：

３．２．邋１．２邋２個(gè)荔枝品種體胚發(fā)生過(guò)程中的丙二醛（ＭＤＡ）含量變化逡逑在培養(yǎng)過(guò)程中，‘新球蜜荔’在ＴＤ和ＴＸ上培養(yǎng)物的丙二醛含量變化平緩，逡逑且?guī)缀鯚o(wú)差異（圖５－Ａ）。逡逑在ＴＤ培養(yǎng)基上，‘大丁香’和‘新球蜜荔’培養(yǎng)物的丙二醛含量也變化平逡逑緩，且無(wú)差異（圖５－Ｂ）。三者的ＭＤＡ變化與含量都無(wú)差異，表明三者在體胚逡逑２９逡逑

都呈單峰曲線，在ＴＤ上，峰值出現(xiàn)在第９邋ｄ，且變化幅度較小，在ＴＸ上，逡逑峰值出現(xiàn)在第１２邋ｄ，變化幅度較大。從第６邋ｄ至第１５邋ｄ，接種在ＴＸ上培養(yǎng)物的逡逑ＰＯＤ活性均高于接種在ＴＤ培養(yǎng)基上的（圖６－Ａ）。逡逑在ＴＤ培養(yǎng)基上，（大丁香’培養(yǎng)物在培養(yǎng)過(guò)程中ＰＯＤ活性都高于‘新球蜜逡逑荔’�！蠖∠恪囵B(yǎng)物ＰＯＤ活性峰值出現(xiàn)在第１２邋ｄ，而‘新球蜜荔’出現(xiàn)在逡逑第９ｄ。邋‘大丁香’培養(yǎng)物ＰＯＤ活性變化幅度遠(yuǎn)大于‘新球蜜荔’（圖６－Ｂ）。逡逑‘大丁香’的高ＰＯＤ活性，更有利于愈傷組織的增殖，而相反‘新球蜜荔’的逡逑低ＰＯＤ活性更有利于體胚發(fā)生。逡逑１６００邋［邐Ａ邋ｉａｏｏｒ邐Ｂ逡逑１k －邐１４．００邋－邐卜、逡逑＞１？０°邋－邐Ｑ邋ｔｚｏｏ邋－邐／邋、、逡逑？0１０００邋＇邐１５０邋００邋－邐／邐、逡逑＾邋ＢＯＯ邋－邐ＸＱＴＤ邋５邋３邋００邋－邐４邐、■邋ＸＱＴＤ逡逑Ｘ邋６００邋－邐？？ａ．－ＸＱＴＸ邋Ｘ．邋６００邋－邐，一邐－？？ＤＤＸＴＤ逡逑0邋４邋００邋－邐．＊邐ｖ邐0邋４．００邋－邐／逡逑２．００邋－邋…？ｆ’．ｉ邐？？？、邐二邋２．００邋－邋＜逡逑000邐■邋Ａ邋，邐，邋ｉ邐？，N

ＣＡＴ活性下降，第１２邋ｄ，邋‘大丁香’與‘新球蜜荔’邋ＣＡＴ活性相似，第１５邋ｄ，逡逑＾大丁香’邋ＣＡＴ酶活性輕微上升，第１８邋ｄ，邋‘大丁香’邋ＣＡＴ活性急劇下降達(dá)到逡逑最低點(diǎn)，并低于‘新球蜜荔’（圖８－Ｂ）。三者的ＣＡＴ活性變化相似，表明ＣＡＴ逡逑與三者的體胚發(fā)生差異關(guān)系不大。逡逑３１逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2790843