【摘要】：GA20ox基因是赤霉素合成途徑的關(guān)鍵基因,是一類與植株伸長生長相關(guān)的基因,廣泛參與植物各個階段的生長發(fā)育過程。本研究根據(jù)從本課題組的草地早熟禾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選出來的GA20ox基因片段,用RACE方法,以草地早熟禾Baron品種為實驗材料,得到PpGA20ox1基因,并通過各種在線軟件對其進行生物信息學(xué)分析。利用q-PCR技術(shù)對PpGA20ox1基因在各個組織中的表達情況進行了分析,結(jié)果顯示,該基因主要在葉片中表達,在葉鞘和根中的表達量較低。利用q-PCR對赤霉素和赤霉素合成抑制劑烯效唑處理條件下PpGA20ox1基因的表達變化情況進行研究,結(jié)果表明,PpGA20ox1基因受到這兩種物質(zhì)的抑制,反映了該基因的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機制。克隆了該基因的啟動子,長度為988bp,分析結(jié)果表明:PpGA20ox基因的啟動子上除了包含TATA-BOX和CAAT-BOX等基本的元件外,還包含茉莉酸甲酯、脫落酸等激素響應(yīng)元件、光響應(yīng)元件、逆境脅迫響應(yīng)元件等。利用Gateway方法構(gòu)建了基因的pAL-PpCGA20ox1-GFP植物表達載體,對基因進行亞細胞定位分析,結(jié)果表明該基因定位在細胞質(zhì)和細胞核中。利用花序侵染法將pAL-PppGA20ox1-GFP載體轉(zhuǎn)化擬南芥,篩選出兩個轉(zhuǎn)基因株系種植T2代植株進行生理指標(biāo)檢測。與野生型WT擬南芥相比,兩個轉(zhuǎn)基因株系的植株高度、葉片大小、株叢大小、葉綠素含量明顯大于WT,花期提前,蓮座形態(tài)、細胞形態(tài)發(fā)生變化。用草地早熟禾的種子培養(yǎng)出可供實驗的愈傷組織,用基因槍法轉(zhuǎn)化了草地早熟禾,得到了再生植株。該研究對PpGA20ox1基因的功能進行了大量研究,為草坪草育種奠定了一定分子基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：北京林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S688.4
【圖文】：

圖１．１赤霉素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)模型（Ｓｕｎ邋Ｔ，邋２０１０）逡逑Ｆｉｇ邋１．１邋Ｍｏｄｅｌ邋ｏｆ邋ＧＡ邋ｓｉｇｎａｌｉｎｇ逡逑１．２．４邋ＧＡ２０ｏｘ基因研宄進展逡逑ＧＡ２０ｏｘ屬于可溶性的雙加氧酶，是ＧＡ生物合成過程中的限速酶（姜志昂等，逡逑２０１３），ＧＡ２０ｏｘ能夠通過氧化失去Ｃ０２的方式催化從ＧＡ１２到ＧＡ９以及ＧＡ５３到ＧＡ２0逡逑的一系列氧化反應(yīng)，形成具有生物活性的ＧＡ４和ＧＡ！。ＧＡ２０ｏｘ對于底物親和力的專逡逑一性不強，底物種類非常廣泛。逡逑ＧＡ２０ｏｘ邋已經(jīng)在高粱（５ｂ巧６／ｃｏ／ｏｒ）邋（Ｐｅｔｔｉ邋Ｃ，２０］５）、擬南芥逡逑Ａａ／／ａ？ａＬ．）（ＨｕａｎｇＳ邋等，１９９８）、玉米（Ｚｅｏ邐Ｌ．）（Ｖｏｏｒｅｎｄ邋Ｗ，２０１６）、柳枝稷（Ｐａｗ／ｃｗｍ逡逑ｖｚ＞ｐ＾ｗ／？Ｌ＿）邋（ＤｏＰＴ邋等，２０１６）、赤松（尸（ＰａｒｋＥＪ邋等，２０１５）等多種逡逑植物中克隆得到，并對其功能進行了大量詳盡的研究，但在草地早熟禾中的研[偵形村義霞ǖ饋ｅ義希牽粒玻

本文編號：2787896