【摘要】：獼猴桃營養(yǎng)豐富,特別是維生素C含量高,是世界上主要水果之一。由丁香假單胞桿菌獼猴桃變種細菌引起的潰瘍病是獼猴桃種植的最大威脅,發(fā)病嚴重時可以毀滅果園。目前獼猴桃潰瘍病在我國獼猴桃主要產(chǎn)區(qū)、主要栽培品種中都有發(fā)現(xiàn),并呈逐年加重之勢。建立獼猴桃離體再生與繁殖技術(shù)不僅可以用于快速繁殖優(yōu)良獼猴桃品種和獼猴桃轉(zhuǎn)基因研究,而且還可以用于培育無病毒、無潰瘍病病原菌的獼猴桃植株。美味獼猴桃‘金魁’具有品質(zhì)佳、豐產(chǎn)性好、抗逆性強、耐貯運、貨架期長等優(yōu)點,近十多年來是我國獼猴桃的主栽品種之一。但'金魁'獼猴桃扦插生根比較困難,生產(chǎn)上常用嫁接繁殖。本項目以'金魁'獼猴桃莖段和成熟葉為外植體,研究了植物生長物質(zhì)、基本培養(yǎng)基對不定芽的誘導(dǎo)、芽的增殖與生根的影響,以及組培苗移栽技術(shù);在此基礎(chǔ)之上,以帶內(nèi)生細菌的芽為材料,研究了脫除組培苗中內(nèi)生細菌的方法,主要取得了以下結(jié)果。1.對果園生長的'金魁'獼猴桃枝條進行表面消毒后,將枝條切成帶芽的莖段,接種在含0.5mg/L BA(6-芐基氨基嘌呤)和0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2 MS培養(yǎng)基(大量元素減半的MS培養(yǎng)基)上,大約43%的莖段長出新的幼莖,但所有莖段基部出現(xiàn)黃色或者白色細菌污染。將幼莖切下接種到新鮮的培養(yǎng)基上后,所有幼莖基部切口處也全部出現(xiàn)細菌污染。這表明本試驗所用的'金魁'獼猴桃枝條的內(nèi)部帶菌嚴重。2.在 1/2 MS 培養(yǎng)基上,0.2 mg/L NAA(萘乙酸)和 1-5 mg/L BA 或 1-2 mg/L TDZ(噻苯隆)的組合均可以誘導(dǎo)'金魁’獼猴桃成熟葉形成愈傷組織和不定芽,但效果差異很大,TDZ比BA更有利于不定芽的誘導(dǎo)。在含0.2 mg/L NAA和5 mg/L BA的培養(yǎng)基上,愈傷組織誘導(dǎo)率為100%、不定芽誘導(dǎo)率為50%,而在含0.2 mg/L NAA和1 mg/L TDZ的培養(yǎng)基上,愈傷組織誘導(dǎo)率為100%、不定芽誘導(dǎo)率為92%。3.在含細胞分裂素的增殖培養(yǎng)基中添加0.3-0.5 mg/L赤霉素(GA3)可以顯著促進芽的伸長,提高增殖效率。同對照相比,0.3-0.5 mg/L赤霉素可以使繁殖系數(shù)提高3-4倍。3.在含細胞分裂素的增殖培養(yǎng)基中添加0.3-0.5mg/L赤霉素(GA3)可以顯著芽的伸長,因而使芽的繁殖系數(shù)提高3-4倍。4.將伸長的芽切成帶芽的小段(莖段)接種在含不同種類、不同濃度細胞分裂素的增殖培養(yǎng)基(含0.3 or 0.5mg/L GA3)上,發(fā)現(xiàn)BA比TDZ、激動素(KT)、玉米素(ZT)能更有效地促進芽的增殖,最佳濃度為0.3-0.5mg/L;在含0.3mg/LGA3和0.3或0.5 mg/LBA培養(yǎng)基上,每個莖段上的芽均能生長、伸長,形成新幼莖,并且新幼莖上的1-2個側(cè)芽也能生長伸長,一個月可以增殖4.5倍以上。5.在相同的BA和NAA組合下,MS培養(yǎng)基比B5,CF和WPM等基本培養(yǎng)基更有利于'金魁'獼猴桃芽的增殖。6.增殖培養(yǎng)基上所增殖的幼莖(2-3 cm長)在含0.7或1 mg/LIBA的1/2MS培養(yǎng)基上可以100%的生根,再生植株平均有5.2和8.5條根。但在含1 mg/L IBA培養(yǎng)基上,許多再生植株基部形成較大的愈傷組織,而且根多由愈傷組織形成;而在含0.7 mg/L IBA培養(yǎng)基上,再生植株無明顯的愈傷組織,根直接從幼莖基部發(fā)生。7.在含0.7 mg/L IBA培養(yǎng)基上再生的植株經(jīng)過溫室里煉苗一個月后,移到室外自然環(huán)境,生長健壯,移栽三個月后的成活率達到96%。8.以帶內(nèi)生菌的幼莖為材料,分離不同大小的莖尖在含1 mg/LBA和0.2mg/LNAA的MS培養(yǎng)基上進行脫菌培養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)0.5 mm長的莖尖脫菌效果較好。通過對脫菌芽進行四代培養(yǎng),可以得到?jīng)]有內(nèi)生細菌的無菌芽。脫菌芽及其再生植株的脫菌效果通過細菌培養(yǎng)和PCR方法得到證實。
【學(xué)位授予單位】：湖北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S663.4
【圖文】：

帶頂芽的莖段都能伸長，而不帶頂芽的莖段只有部分（大約５０－６０％）可以長出逡逑１個幼蓮；在含０．１邋ｍｇ／Ｌ邋ＢＡ的培養(yǎng)基上，大約９０％的芽段可以長出１個幼基在含０．３逡逑和０．５邋ｍｇ／Ｌ邋ＢＡ的培養(yǎng)基上，每個芽段可以長出２－３個幼莖（圖１Ｄ），因而X椫誠凳義希ǎ矗叮矗梗┫災(zāi)哂諼蓿攏梁停埃卞澹恚紓體澹攏戀拇恚ū恚玻�。辶x希保跺義

本文編號：2772608