【摘要】：本試驗(yàn)以平菇“99”菌株為試驗(yàn)材料,采用組織分離、尖端分離、原生質(zhì)體再生技術(shù)分別進(jìn)行提純復(fù)壯技術(shù)的應(yīng)用效果進(jìn)行研究,試驗(yàn)共獲得59個(gè)分離菌株,經(jīng)過(guò)初步篩選得到19個(gè)優(yōu)勢(shì)菌株;進(jìn)一步對(duì)19個(gè)優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行生理、生化、真實(shí)性及農(nóng)藝性狀等檢測(cè),獲得了性狀優(yōu)良的提純復(fù)壯菌株11個(gè),主要研究結(jié)果如下:(1)利用組織分離技術(shù)獲得4個(gè)菌株,菌絲長(zhǎng)速、漆酶活性等性狀測(cè)定結(jié)果表明,4個(gè)復(fù)壯菌株在漆酶活性、生物學(xué)產(chǎn)量菌絲生長(zhǎng)速度等方面均優(yōu)于出發(fā)對(duì)照菌株;4個(gè)復(fù)壯菌株在酯酶同工酶和ISSR電泳圖譜中與對(duì)照菌株無(wú)顯著差異。綜合農(nóng)藝性狀進(jìn)行篩選獲得三個(gè)優(yōu)勢(shì)復(fù)壯菌株,分別命名為“PoZ1”、“PoZ2”、“PoZ3”。(2)利用尖端菌絲分離技術(shù)獲得3個(gè)分離菌株,菌絲長(zhǎng)速、漆酶活性等性狀測(cè)定結(jié)果表明,3個(gè)復(fù)壯菌株在漆酶活性、發(fā)酵液生物產(chǎn)量、生物學(xué)產(chǎn)量等方面均優(yōu)于出發(fā)對(duì)照菌株;3個(gè)復(fù)壯菌株母種、栽培種菌絲日平均生長(zhǎng)速度均快于出發(fā)對(duì)照菌株;有2個(gè)菌株在原種菌絲日平均生長(zhǎng)速度快于出發(fā)對(duì)照菌株;3個(gè)復(fù)壯菌株在酯酶同工酶和ISSR電泳圖譜中與對(duì)照菌株無(wú)顯著差異。綜合農(nóng)藝性狀進(jìn)行篩選獲得兩個(gè)優(yōu)勢(shì)復(fù)壯菌株分別命名為“PoJ1”和“PoJ2”。(3)運(yùn)用原生質(zhì)體再生技術(shù)分離得到50個(gè)菌株,通過(guò)對(duì)50個(gè)菌株進(jìn)行菌絲長(zhǎng)速、菌絲顏色、菌落形態(tài)等篩選獲得12個(gè)優(yōu)勢(shì)復(fù)壯菌株,進(jìn)一步對(duì)12個(gè)復(fù)壯菌株的菌絲長(zhǎng)速、漆酶活性等性狀研究表明,10個(gè)復(fù)壯菌株母種菌絲和原種菌絲日平均生長(zhǎng)速度顯著優(yōu)于對(duì)照菌株,6個(gè)菌株在栽培種菌絲日平均生長(zhǎng)速度方面優(yōu)于對(duì)照菌株,12個(gè)復(fù)壯菌株在漆酶活性、菌絲生物產(chǎn)量、第一潮菇產(chǎn)量等方面均優(yōu)于出發(fā)對(duì)照菌株,12個(gè)復(fù)壯菌株在酯酶同工酶和ISSR電泳圖譜中與對(duì)照菌株無(wú)顯著差異。綜合農(nóng)藝性狀進(jìn)行篩選獲得6個(gè)優(yōu)勢(shì)復(fù)壯菌株,分別命名為“Po11”、“Po23”、“Po26”、“Po30”、“Po45”、“Po46”,其中“Po45”菌株在菌絲長(zhǎng)速、發(fā)酵液生物產(chǎn)量、第一潮菇產(chǎn)量等方面優(yōu)于其他復(fù)壯菌株。(4)通過(guò)對(duì)三種復(fù)壯技術(shù)獲得的菌株進(jìn)行篩選比較。結(jié)果表明應(yīng)用原生質(zhì)體再生復(fù)壯技術(shù)提純平菇菌株應(yīng)用效果最佳,利用原生質(zhì)體再生復(fù)壯技術(shù)獲得復(fù)壯菌株在菌絲長(zhǎng)速、漆酶活性、第一潮菇產(chǎn)量、農(nóng)藝性狀等方面都要優(yōu)于組織分離與尖端分離復(fù)壯技術(shù)獲得的菌株。
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S646.14
【圖文】：

0.1g 隔膜培養(yǎng)菌絲，加入適當(dāng)液氮迅速研磨使組織完全破裂，按 DNA 提取試劑盒具體操作步驟進(jìn)行 DNA 樣品提取并對(duì)獲得的 DNA 樣品進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，將片段大于 20kb、無(wú)降解的 DNA 樣品置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?DNA 樣品進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增處理。PCR 反應(yīng)體系為 2×PCR Master Mix10μl，10μm 引物 1μl，DNA 模板 1μl，ddH2O 8μl，PCR 反應(yīng)總體積為 20μl。PCR 反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性 4min，94℃變性 30s，55℃退火 20s，72℃延伸 2min，共 33 個(gè)循環(huán)，72℃補(bǔ)齊 10min，4℃終止反應(yīng)。對(duì) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，電泳條件為：取 6μl 反應(yīng)產(chǎn)物，6μl Marke分別點(diǎn)樣于 1.0%瓊脂糖凝膠上，在 1×TAE 緩沖液中電泳，電壓為 8V/cm，待溴酚蘭距凝膠前緣 1cm 左右停止電泳。取出膠板在紫外凝膠成像儀上拍照分析。2.3 結(jié)果與分析2.3.1 組織分離選取 4 朵菇形圓整生長(zhǎng)良好的子實(shí)體分別進(jìn)行組織分離得到 4 株組織分離菌株分別標(biāo)記為 PoZ1、PoZ2、PoZ3、PoZ4。部分子實(shí)體形態(tài)見(jiàn)圖 2-1。

河北工程大學(xué)碩士學(xué)位論文 2-1 組織分離復(fù)壯菌株母種菌絲日平均生長(zhǎng)速度比on of daily average growth rate of seed hyphae of tissuestrains菌株編號(hào)train numberAverage（cm/d）差異顯著性Significant differenc0.05 0.01PoZ1 1.23 a APoZ3 1.22 a APoZ2 1.20 a ABPoZ4 1.06 b BCCK 1.01 b C

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2736089