發(fā)布時間：2020-06-25 03:52

【摘要】：葡萄生長發(fā)育過程中會遭受多重病原菌侵襲,如繁殖能力很強(qiáng)的腐生型真菌灰霉菌,不僅嚴(yán)重影響葡萄葉片和果實(shí)正常生長,還會危害葡萄植株第二年的生長發(fā)育。乙烯響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子(Ethylene response factor,ERF)在植物防御真菌和細(xì)菌侵染過程中發(fā)揮重要作用,但關(guān)于葡萄ERF轉(zhuǎn)錄因子功能研究還較少。課題組在前期利用RNA-Seq技術(shù)對高抗灰霉菌品種雙優(yōu)和高感灰霉菌的紅地球進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,篩選出了灰霉菌響應(yīng)的誘導(dǎo)差異表達(dá)VaERF20。本研究從中國野生山葡萄‘雙優(yōu)’中克隆了VaERF20,轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥,研究VaERF20基因功能及作用機(jī)制。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行了VaERF20在中國野生山葡萄‘雙優(yōu)’和歐洲葡萄‘紅地球’葉片接種灰霉菌后表達(dá)分析,結(jié)果表明灰霉菌會誘導(dǎo)VaERF20基因表達(dá)量上調(diào)并且在處理后的4h表達(dá)量出現(xiàn)最大值;VaERF20 cDNA序列通過同源序列法從中國野生山葡萄‘雙優(yōu)’葉片中克隆獲得,VaERF20的開放閱讀框長度為459bp,可編碼153個氨基酸殘基。VaERF20的cDNA序列與歐洲葡萄‘黑比諾’的序列相似性為84.53%,氨基酸的同源相似性為85.06%。通過系統(tǒng)進(jìn)化分析得出,VaERF20與擬南芥AtERF98和水稻OsERF89親緣關(guān)系最近。2.構(gòu)建pCAMBIA2300-35S-VaERF20過量表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥。將灰霉菌、PstDC3000接種到野生型(Col-0)植株和轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片上,結(jié)果表明VaERF20過表達(dá)能夠增強(qiáng)擬南芥對灰霉菌、PstDC3000的抗性�；颐咕�、PstDC3000誘導(dǎo)的活性氧(ROS)積累模式完全不同。VaERF20過表達(dá)擬南芥中,SA和JA/ET信號相關(guān)的防御基因的表達(dá)水平在接種B.cinerea和PstDC3000后均上調(diào)。轉(zhuǎn)基因擬南芥和Col-0植株葉片進(jìn)行PstDC3000、flg22和LPS,觀察葉片胼胝質(zhì)積累和氣孔開閉情況。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因擬南芥比Col-0植株積累更多的胼胝質(zhì),同時氣孔關(guān)閉程度也大于Col-0葉片。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S663.1
【圖文】：

20 基因氨基酸序列比對分析多重序列比對分析用 DNAman 軟件完成，系統(tǒng)進(jìn)化樹分析用F20 保守結(jié)構(gòu)域位置預(yù)測在 SMART(http://smart.embl-heidelb分析20 在葡萄灰霉菌處理后的表達(dá)分析品種中國野生山葡萄‘雙優(yōu)’的葉片接種灰霉菌，并采集接種后光定量分析。試驗(yàn)結(jié)果表明，與模式處理相比，灰霉菌處理上升，并且在 4hpi 達(dá)到峰值(圖 2-1)。說明 VaERF20 響應(yīng)葡

圖 2-4 ERF20 蛋白質(zhì)序列比對VaERF20 的蛋白質(zhì)序列與歐洲葡萄‘黑比諾’的序列相似性為 85.06%。紅框部分為保守結(jié)構(gòu)域。Figure 2-4 ERF20 protein sequence alignment.Chinese wild V. amurensis acc. ‘Shuangyou’ ERF20 protein sequence shows 85.06%sequence homology to V. vinifera cv. PN40024. The sequences in red boxes represent conserved domains.

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王海波;王孝娣;王寶亮;何錦興;劉萬春;劉鳳之;;中國果樹設(shè)施栽培的現(xiàn)狀、問題及發(fā)展對策[J];農(nóng)業(yè)工程技術(shù)(溫室園藝);2009年08期

2 張今今,王躍進(jìn),王西平,楊克強(qiáng),楊進(jìn)孝;葡萄總RNA提取方法的研究[J];果樹學(xué)報(bào);2003年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 萬然;中國野生葡萄種質(zhì)葉片抗灰霉病的機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

2 呂慶峰;近現(xiàn)代中國葡萄酒產(chǎn)業(yè)發(fā)展研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2013年

本文編號：2728816