常山胡柚的“祖宗樹”組織培養(yǎng)及其起源的研究

發(fā)布時間：2020-06-23 12:08

【摘要】：常山胡柚(Citrus changshan-huyou Y.B.Chang)起源于浙江省常山縣,為柑桔屬的一個新種,具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值。常山胡柚是天然雜交種,有性繁殖會出現(xiàn)明顯的性狀分離現(xiàn)象,親本的優(yōu)良性狀難以保持。另外,常山胡柚的起源至今尚不明確。因此,本論文開展了常山胡柚的“祖宗樹”組織培養(yǎng)再生植株的研究;并利用國際上鑒定物種的通用引物,對常山胡柚的起源進行了分析。主要研究結(jié)果如下:(1)首先利用常山胡柚普通栽培品種的幼葉、幼莖和幼胚作為外植體進行培養(yǎng),結(jié)果表明,幼胚是組織培養(yǎng)再生植株的最佳外植體。據(jù)此,選取常山胡柚的“祖宗樹”幼胚為外植體,置于冰箱4℃處理6 d,在0.5 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA的MS固體培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織頻率最高(78%);愈傷組織在1mg/L 6-BA的MS固體培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生芽的分化率最高(78%);叢生芽在0.4 mg/L IAA的MS固體培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)生根效果最好。成功地建立了常山胡柚的“祖宗樹”植株再生快繁體系,并得到了大量常山胡柚的“祖宗樹”組培苗。(2)選取常山胡柚的“祖宗樹”、常山胡柚普通栽培品種、甜橙、衢橘、柚和i*柑作為材料,分別提取其基因組DNA。利用葉綠體特征基因片段(rbc L、rpo C1、rpo B和trn H-psb A)、5.8S r RNA和28S r RNA基因間隔區(qū)片段(ITS)、核糖體特征基因片段(18S r RNA-5S r RNA)和線粒體特征基因片段(nad1 exon BC)序列設(shè)計引物,進行目的基因片段的擴增,分別獲得了葉綠體特征基因序列24條(rbc L、rpo C1、rpo B和trn H-psb A各6條),基因間隔區(qū)序列6條,核糖體特征基因序列6條,線粒體特征基因序列6條。利用Clustal W和MAGE 7.0制作系統(tǒng)進化樹,ITS系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與甜橙和i*柑遺傳距離最近;常山胡柚普通栽培品種與衢橘遺傳距離最近。rbc L系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與柚的遺傳距離最近;常山胡柚普通栽培品種與甜橙的遺傳距離最近。rpo C1系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與常山胡柚普通栽培品種遺傳距離最近。rpo B系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與柚的遺傳距離最近;常山胡柚普通栽培品種與常山胡柚“祖宗樹”遺傳距離最近。trn H-psb A系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與甜橙的遺傳距離最近;常山胡柚普通栽培品種與常山胡柚“祖宗樹”遺傳距離最近。18S-5S r RNA系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示,常山胡柚“祖宗樹”與柚的遺傳距離最近;常山胡柚普通栽培品種與柚的遺傳距離最近。nad1 exon B-C系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示常山胡柚“祖宗樹”與普通栽培常山胡柚、甜橙和i*柑的遺傳距離最近,常山胡柚普通栽培品種與甜橙和i*柑的遺傳距離最近。綜合上述結(jié)果,顯示常山胡柚“祖宗樹”與甜橙、柚、衢橘和i*柑遺傳距離均較近,常山胡柚“祖宗樹”可能起源多種雜交;常山胡柚普通栽培品種來源于常山胡柚“祖宗樹”,但與祖宗樹并非完全一致,可能是在選育常山胡柚普通栽培品種時,常山胡柚不斷地與甜橙、柚、衢橘和i*柑進行了雜交。本研究成功建立了常山胡柚的“祖宗樹”植株再生技術(shù)體系,為保存和利用“祖宗樹”這一特有的種質(zhì)資源提供了基礎(chǔ);另外,本研究結(jié)果顯示常山胡柚為甜橙、柚、衢橘和i*柑等多重自然雜交形成的物種,研究結(jié)果對常山胡柚的育種和優(yōu)良性狀的開發(fā)具有重要的意義。
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S666.3
【圖文】：