【摘要】：節(jié)瓜(Benincasa hispida Cogn.var.chieh-qua How.),別名毛瓜、毛節(jié)瓜、小冬瓜等,是葫蘆科(Cucurbitaceae)冬瓜屬(Benincasa)一年生草本植物,是我國(guó)華南地區(qū)普遍消費(fèi)的瓜類蔬菜。近年來(lái)節(jié)瓜種植面積不斷擴(kuò)大,節(jié)瓜種子市場(chǎng)逐漸擴(kuò)大,新的雜交品種不斷出現(xiàn),節(jié)瓜種子純度的快速鑒定越來(lái)越重要。種子在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中作為最基本的生產(chǎn)資料,是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中不可替代的要素,因此種子的質(zhì)量檢驗(yàn)工作在種子生產(chǎn)銷售過(guò)程中是非常重要的一環(huán),而種子純度鑒定是種子質(zhì)量檢驗(yàn)工作中重要組成部分。本研究基于節(jié)瓜全基因組測(cè)序結(jié)果,設(shè)計(jì)適用于節(jié)瓜的SSR引物,運(yùn)用SSR分子標(biāo)記技術(shù),建立室內(nèi)快速鑒定節(jié)瓜雜種種子純度的技術(shù)體系,對(duì)節(jié)瓜品種純度進(jìn)行鑒定。主要研究結(jié)果如下:1、通過(guò)研究DNA提取方法,初步探索出適用于節(jié)瓜SSR-PCR的DNA快速提取方法(堿處理法),比較了 DNA快速提取法和CTAB法,前者具有如下優(yōu)點(diǎn):(1)步驟簡(jiǎn)單易操作,不需要多次離心和反復(fù)抽提。(2)相對(duì)于CTAB法,節(jié)省大量時(shí)間,提取的樣品越多,節(jié)省的時(shí)間越多。(3)試劑材料的消耗較少,試驗(yàn)成本低。2、以8份親本材料DNA為模板,篩選了200對(duì)節(jié)瓜SSR引物,獲得8對(duì)能夠穩(wěn)定擴(kuò)增、帶型簡(jiǎn)單,表現(xiàn)為父本顯性和父母本共顯性的引物可用于6個(gè)雜交組合純度鑒定中。對(duì)課題組16份雜種種子進(jìn)行快速鑒定,對(duì)比其中10份田間鑒定結(jié)果,驗(yàn)證了該技術(shù)體系的準(zhǔn)確性。3、本研究運(yùn)用節(jié)瓜子葉DNA快速提取方法(堿處理法)和SSR分子標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,初步建立節(jié)瓜雜種種子SSR分子標(biāo)記純度鑒定技術(shù)體系。
【圖文】：

ＤＮＡ純度低。用改良ＣＴＡＢ法提取的親本材料ＤＮＡ經(jīng)核酸蛋白儀檢測(cè)，逡逑ＯＤ２６ｑ／ＯＤ２８0比值在１．７８－２．０２之間，表明所提取的ＤＮＡ質(zhì)量較好，純度較高，部分樣品逡逑ＤＮＡ有ＲＮＡ殘留。用１％的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)兩種方法提�。模危临|(zhì)量（圖３－１），逡逑表明改良ＣＴＡＢ法提取的ＤＮＡ比快速法提取的ＤＮＡ質(zhì)量好，純度高。逡逑■■■■■■■■逡逑圖３－１不同ＤＮＡ提取方法電泳檢測(cè)結(jié)果逡逑注：１－４為快速法，５－８為ＣＴＡＢ法逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＤＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逡逑Ｎｏｔｅ：邋１－４邋ｉｓ邋ａ邋ｆａｓｔ邋ｍｅｔｈｏｄ，５－８邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ＣＴＡＢ邋ｍｅｔｈｏｄ逡逑３．１．２不同ＤＮＡ提取方法對(duì)ＰＣＲ產(chǎn)物的影響逡逑為了驗(yàn)證快速法提取的ＤＮＡ質(zhì)量是否能夠滿足ＳＳＲ－ＰＣＲ擴(kuò)增的條件，利用在８逡逑份親本材料中不能擴(kuò)增出特異性條帶的引物對(duì)快速法提取的雜種ＤＮＡ和其中４份使用逡逑２１逡逑

注：１－４為ＣＴＡＢ法，５－８為快速法逡逑Ｆｉｇ．３－２邋ＰＣＲ邋ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＤＮＡ邋ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ邋ｍｅｔｈｏｄｓ逡逑Ｎｏｔｅ：邋１－４邋ｉｓ邋ｔｈｅ邋ＣＴＡＢ邋ｍｅｔｈｏｄ，邋５－８邋ｉｓ邋ａ邋ｆａｓｔ邋ｍｅｔｈｏｄ逡逑３．２邋ＳＳＲ分子標(biāo)記引物的篩選逡逑利用８份親本材料對(duì)２００對(duì)引物進(jìn)行親本多態(tài)性鑒定，結(jié)果共有９０對(duì)ＳＳＲ引物可逡逑擴(kuò)增出清晰穩(wěn)定的產(chǎn)物，，其中有３４對(duì)引物在６個(gè)雜交組合間表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)性比逡逑率為３７．７８％，其中有８對(duì)引物可將６個(gè)雜交組合與其親本區(qū)別開來(lái)（表３－１）。其中引逡逑物ｓｃａｆｆｏｌｄ４４４９在雜交組合Ｒ０５ｘＲ0７中表現(xiàn)為父母本共顯性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ４７７５在雜交逡逑組合邋Ｒ０２ｘＲ０１、Ｒ０３ｘＲ０１、Ｒ０２ｘＲ０４、Ｒ０５ｘＲ０７邋中表現(xiàn)為父母本共顯性；引物邋ｓｃａｆｆｏｌｄ５６７４逡逑在雜交組合Ｒ0３ｘＲ0ｌ、Ｒ0２ｘＲ0４中表現(xiàn)為父母本共顯性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ７７０５在雜交組合逡逑Ｒ０２ｘＲ0ｌ、Ｒ0２ｘＲ0４中中表現(xiàn)為父本顯性；引物ｓｃａｆｆｏｌｄ８９０２在雜交組合Ｒ０５ｘＲ０８中表逡逑ｘｘ、ｘ
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S642.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2711639