【摘要】：柑橘是全球最重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,是世界第一大水果,是世界第三大貿(mào)易農(nóng)產(chǎn)品。中國是世界上栽培柑橘最早的國家,栽培歷史已有4000年以上,分布區(qū)域極為遼闊。在中國柑橘栽培面積和產(chǎn)量均高居世界第一,在國內(nèi)也是僅次于蘋果的第二大水果,2016年中國柑橘栽培面積3841.23萬畝,產(chǎn)量3764.87萬噸。廣西地處中國西南邊陲,北有南嶺山脈,西臨云貴高原,境內(nèi)六萬大山、九萬大山連綿數(shù)千里,多山多雨的獨特地理環(huán)境孕育了豐富的柑橘種質(zhì)資源。特色地方品種如沙田柚,金柑等馳名中外,野生柑橘資源如大種橙、宜昌橙、姑婆山野生皺皮柑、姑婆山野生元橘、酸橘、廣西土檸檬等極具特色。由于各種病蟲害的危害以及保護(hù)意識的缺失,廣西地方柑橘資源流失的風(fēng)險很大,因此系統(tǒng)的收集、保存廣西地方資源,并運(yùn)用孢粉學(xué)和分子標(biāo)記手段分析遺傳多樣性,明確廣西地方柑橘資源的現(xiàn)狀、分類地位以及親緣關(guān)系至關(guān)重要。本研究通過花粉形態(tài)和SNP對廣西地方柑橘種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析,主要結(jié)果如下:1.枳屬、金柑屬和柑橘屬的花粉具有不同的形態(tài)特征。其中,不同種屬的品種萌發(fā)器官均為孔溝類型,即花粉表面同時存在著孔和溝�；ǚ哿４蠖啻嬖�4條孔溝,部分品種的花粉具有5條孔溝,如檸檬、宜昌橙以及部分柚�；ǚ鄣臉O面觀形狀均為四裂圓形或者五裂圓形,赤道面形狀存在三種形狀,分別為圓形、近圓形和長圓形。枳屬、金柑屬和柑橘屬品種的花粉粒的極軸和赤道軸長范圍,顯示花粉大小均為中等大小,但仍存在差異�；ǚ哿５拇笮�,金柑屬的花粉粒最小,枳屬次之,柑橘屬花粉粒較大,其中柑橘屬中枸櫞區(qū)、宜昌橙區(qū)、橙區(qū)、柚區(qū)以及野生寬皮柑橘的花粉粒較大,大翼橙區(qū)和寬皮柑橘區(qū)的其余品種花粉粒較小;花粉粒的形狀,枳屬為圓球形,金柑屬和柑橘屬的花粉粒為長球形或者近長球形;外壁紋飾類型,柚部分品種和葡萄柚具有穴狀紋飾,其余種屬都具有網(wǎng)狀紋飾或細(xì)網(wǎng)狀紋飾;從網(wǎng)眼和網(wǎng)脊來看,金柑屬、柑橘屬寬皮柑橘區(qū)除野生品種外網(wǎng)脊也普遍較寬,網(wǎng)眼以野生寬皮柑橘的最大;P/E均值,柑橘屬酸橙類最大,為1.58,枳屬最小,為1.10。2.姑婆山野生皺皮柑花粉以單粒形式存在,中等大小,存在4條孔溝,花粉粒形狀為長球形,極軸長度為(35.24±1.94)μm,赤道軸長度為(20.39±1.35)μm,P/E均值為1.73,花粉粒具有4條孔溝,極面觀為四裂圓形,赤道面觀為長圓形,網(wǎng)眼較大,形狀為不規(guī)則圓形或多邊形,網(wǎng)眼直徑為(1.65±0.09)μm,網(wǎng)脊較狹且突出,寬度為(0.51±0.10)μm,花粉形態(tài)特征比較及聚類分析結(jié)果表明:姑婆山野生皺皮柑(莽山野柑)應(yīng)該為柑橘屬內(nèi)獨立的一個種,是除枸櫞(C.Medica)、柚(C.grandis)和寬皮柑橘(C.reticulata)外的第4個真正的種。3.姑婆山野生元橘花粉都以單粒形式存在,中等大小,存在4條孔溝,花粉粒形狀為長球形,極軸長度為(30.21±1.14)μm,赤道軸長度為(22.12±1.97)μm,P/E均值為1.37,花粉粒具有4條孔溝,極面觀為四裂圓形,赤道面觀為長圓形,網(wǎng)眼較小,形狀多為圓形或近圓形,網(wǎng)眼直徑為(0.86±0.08)μm,網(wǎng)脊平寬光滑,寬度為(0.47±0.09)μm,花粉形態(tài)特征比較及聚類分析結(jié)果表明:姑婆山野生元橘比道縣野橘、立花橘更為原始。4.沙柑花粉為中等型、形狀為長球形,存在4條孔溝,極軸長為(29.98±1.18)μm,赤道軸長為(22.32±1.03)μm;外壁紋飾為網(wǎng)狀紋飾,網(wǎng)眼為圓形或者近圓形,網(wǎng)眼直徑大小為(0.89±0.10)μm,網(wǎng)脊平寬光滑不隆起,網(wǎng)脊寬度為(0.62±0.07)μm,花粉形態(tài)比較及聚類分析結(jié)果表明:沙柑應(yīng)為雜種起源,與扁柑、年橘、廣西紅皮酸橘的花粉特征較為接近,在遺傳距離0.442處聚為一組,與岑溪酸橘、印度酸橘、姑婆山野生元橘、賀州野橘等可能存在一定的親緣關(guān)系但親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。5.SNP研究中完成了柑橘SNP分子標(biāo)記分析研究體系的建立,為今后柑橘種質(zhì)資源遺傳多樣性的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ),其中著重對廣西姑婆山野生柑橘資源進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示,姑婆山野生皺皮柑6號與莽山野柑(尖葉)、莽山野柑(圓葉)有較近的親緣關(guān)系,而與姑婆山野生皺皮柑2號有明顯的區(qū)別,與孢粉學(xué)研究結(jié)果相一致。
【圖文】：

30圖 2 基于花粉形態(tài)的柑橘資源聚類圖Fig.2 Dendrogram of cluster analysis for citrus germplasm based on pollen morphological3.4 沙柑花粉形態(tài)觀察研究3.4.1 花粉的外形大小沙柑花粉以單粒形式存在，，中等大小，花粉粒形狀為長球形，極軸長度為（29.98±1.18） μm，赤道軸長度為（22.32±1.03） μm，P/E 均值為 1.34，花粉粒具有 4條孔溝，極面觀為四裂圓形，赤道面觀為長圓形[128]（見表 6）。

瓊脂糖凝膠濃度為 1.2%，電泳電壓為 130V,電泳時間為 45 分鐘，部分試驗材料的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果如圖 4，從圖中可以看出，提取的基因組 DNA 電泳條帶清晰，沒有明顯的拖帶現(xiàn)象，并且點樣孔殘留物較少，檢測結(jié)果說明提取的基因組 DNA 濃度較高，質(zhì)量較好，可以滿足后續(xù) PCR 試驗要求，將 DNA 放置于-40℃進(jìn)行保存。
【學(xué)位授予單位】：廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S666

【參考文獻(xiàn)】

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3 李

本文編號：2706128