【摘要】：山楂(Crataegus spp.)為薔薇科山楂屬植物,是重要的果樹資源,但由于其生長(zhǎng)周期長(zhǎng),遺傳組成復(fù)雜,自交不親和等問題限制了新品種的研發(fā)進(jìn)度。本研究以果實(shí)大小和果實(shí)硬度都存在顯著性差異的山楂品種‘山東大綿球’(母本)和‘新賓軟籽’(父本)創(chuàng)建雜交群體,選用130株雜交F1代為作圖群體,采用RAD測(cè)序技術(shù)開發(fā)的SNP標(biāo)記構(gòu)建山楂高密度分子遺傳圖譜;對(duì)作圖群體果實(shí)進(jìn)行單果重、縱徑、橫徑、果皮穿刺硬度、果皮脆性和果肉平均硬度6個(gè)表型性狀的調(diào)查,并利用R/qtl軟件,選用區(qū)間QTL作圖法(IQM),對(duì)群體果實(shí)的6個(gè)性狀進(jìn)行QTL定位研究。主要研究結(jié)果如下:1.從128對(duì)引物組合中篩選出兩對(duì)引物組合‘CH05e06’和‘CH03g06’用于雜交后代實(shí)生苗木真假雜種鑒定,結(jié)果表明,本研究采用的130株雜交后代單株均為真雜種。2.通過篩選獲得6384個(gè)高質(zhì)量的SNP標(biāo)記位點(diǎn)。應(yīng)用JoinMap分別繪制出雙親的遺傳圖譜及雙親整合的遺傳圖譜,三個(gè)圖譜均含有17個(gè)連鎖群。母本‘山東大綿球’的遺傳圖譜共有2656個(gè)SNP標(biāo)記,覆蓋總圖距為2689.65cM,位點(diǎn)之間的平均遺傳距離為1.34cM,連鎖群的平均長(zhǎng)度為158.21 cM,每個(gè)連鎖群的平均標(biāo)記數(shù)為1564個(gè);父本‘新賓軟籽’的遺傳圖譜共有4085個(gè)SNP標(biāo)記,覆蓋總圖距為2558.41cM,位點(diǎn)之間的平均遺傳距離為0.64cM,連鎖群的平均長(zhǎng)度為150.49cM,每個(gè)連鎖群的平均標(biāo)記數(shù)為240.29個(gè);整合圖譜中共有6384個(gè)SNP標(biāo)記,覆蓋總圖距為2470.02cM,位點(diǎn)之間的平均遺傳距離為0.41cM,連鎖群的平均長(zhǎng)度為145.30cM,每個(gè)連鎖群的平均標(biāo)記數(shù)為375.53個(gè)3.在整合圖譜中分別檢測(cè)到與單果重相關(guān)的QTL位點(diǎn)2個(gè),可解釋的表型變異率為19%和21.8%;與縱徑相關(guān)的QTL位點(diǎn)2個(gè),可解釋的表型變異率為18.1%和24.3%;與橫徑相關(guān)的QTL位點(diǎn)1個(gè),可解釋的表型變異率為21.4%;與果皮穿刺硬度相關(guān)的QTL位點(diǎn)6個(gè),可解釋的表型變異率在17.7%-25.2%之間;與果皮脆性相關(guān)的QTL位點(diǎn)5個(gè),可解釋的表型變異率在18.1%-32.2%之間;與果肉平均硬度相關(guān)的QTL位點(diǎn)5個(gè),可解釋的表型變異率在18.1%-19.9%之間;本研究構(gòu)建的遺傳圖譜是目前山楂屬植物中報(bào)道的分子標(biāo)記數(shù)量最多的遺傳圖譜,該圖譜不僅為今后山楂重要性狀QTL精細(xì)定位奠定基礎(chǔ),也將對(duì)山楂分子輔助選擇育種起到較大的促進(jìn)作用。
【圖文】：

材料與方法中篩選 2 對(duì)引物用于雜種鑒定。然后對(duì)這兩對(duì)引物的溫度梯度依次為 63.0℃、62.6℃、61.7℃、60.4℃2.6℃、51.3℃、50.4℃以及 50.0℃。最后進(jìn)行 PC沒有雜帶的條帶，該條帶對(duì)應(yīng)的退火溫度即為最凝膠電泳及銀染顯色崗，2016）的方法，在其方法的基礎(chǔ)上略有改動(dòng)建及測(cè)序A 進(jìn)行酶切試驗(yàn)。對(duì)得到的酶切片段（RAD 標(biāo)簽篩選、連接 P2 測(cè)序接頭、PCR 擴(kuò)增、文庫(kù)質(zhì)檢合格，測(cè)序策略為 IlluminaPE150。具體流程如圖 2-1：

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果分析3.1 基因組 DNA 濃度及質(zhì)量檢測(cè)利用 1%瓊脂糖凝膠電脈檢測(cè)基因組 DNA 的質(zhì)量，結(jié)果顯示:DNA 主帶清晰，無(wú)拖尾現(xiàn)象，沒有嚴(yán)重糖類或蛋白污染(圖 2-1 )。對(duì)于不符合試驗(yàn)要求的樣品，重新提取，保證所有樣品 DNA 濃度和質(zhì)量符合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步利用分光光度計(jì)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn) DNA濃度均大于 50 ng/uL，，OD260/280 在 1.8~2.2 之間能夠滿足接下來(lái)試驗(yàn)要求，可用于進(jìn)一步的試驗(yàn)，然后將所有試驗(yàn)樣品 DNA 稀釋至 50ng/μL,在-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S661.5

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本文編號(hào)：2682479