【摘要】：本研究以4個柑橘品種(‘大紅袍’紅橘、‘紐荷爾’臍橙、‘尤力克’檸檬和‘梁平’柚)的果實為實驗材料,采用超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜(Ultra performance liquidchromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)對其果皮和果肉中主要的類黃酮進行測定;選取多甲氧基黃酮(Polymethoxyflavones,PMFs)含量最豐富的紅橘果皮為材料,優(yōu)化了總多甲氧基黃酮(TPMF)的提取條件;利用大孔吸附樹脂對PMFs粗提物中的TPMF進行富集純化,并應(yīng)用質(zhì)譜引導(dǎo)的制備型高效液相色譜同時分離了多種PMFs單體。主要研究內(nèi)容如下:(1)4個柑橘品種果實中主要類黃酮的測定:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS對4種柑橘果實中主要類黃酮成分進行測定,鑒定出16種主要的類黃酮,包括7種黃烷酮和9種PMFs�？疾炝嘶赨PLC-PDA的柑橘類黃酮含量測定法,16種類黃酮的線性關(guān)系均良好,檢出限和定量限分別小于0.7167和1.7917μg/mL,日內(nèi)和日間精密度分別為0.70%-1.07%和0.38%-1.67%,加標回收率為92.95%-105.71%,該方法準確可靠、適用性良好�；谠摲椒�,本研究比較了柑橘不同品種、不同采樣地點和不同果實部位中類黃酮的分布,結(jié)果表明:‘大紅袍’紅橘中的PMFs種類及TPMF含量均優(yōu)于其它三個品種,PMFs僅在果皮中有檢出,而果肉無檢出。(2)PMFs提取條件的優(yōu)化:以‘大紅袍’紅橘果皮為實驗材料,利用單因素實驗研究各提取因素(提取方式、提取溶劑、料液比、溫度、時間和提取次數(shù))對TPMF提取量的影響,并通過響應(yīng)面設(shè)計進一步優(yōu)化提取條件。獲得的最佳提取條件為:超聲波輔助提取TPMF,液料比1:20,提取溶劑為89.1%乙醇/水溶液,提取溫度40.9℃,單次提取時間為34.1 min,重復(fù)提取2次,在此條件下紅橘果皮的TPMF提取量為11.09 mg/g DW。(3)PMFs富集純化方法的建立:以‘大紅袍’紅橘果皮提取所得的PMFs粗提物為材料,比較了8種大孔吸附樹脂(HPD100、HPD300、HPD400、HPD600、NKA-9、D101、DM130和AB-8)對TPMF的靜態(tài)吸附和解吸能力,結(jié)果表明:HPD300型大孔樹脂對TPMF的富集效果最佳。對HPD300型樹脂吸附TPMF的吸附動力學(xué)和熱力學(xué)研究發(fā)現(xiàn),該樹脂對TPMF的吸附過程符合準二級吸附模型和Langmuir方程,吸附速率主要受液膜擴散控制。基于動態(tài)吸附和解吸附的單因素實驗,分析得出富集純化TPMF的最佳工藝為:以TPMF濃度為8.70 mg/mL的粗提液上樣,上樣流速4.0 BV/h,上樣體積11 BV;用7%乙醇溶液預(yù)先洗脫6 BV進行除雜,再以90%乙醇水溶液為洗脫液,洗脫流速4.0 BV/h,洗脫體積4 BV。經(jīng)HPD300型樹脂富集純化后,干燥狀態(tài)下PMFs粗提物中的TPMF含量由31.720±1.255 mg/g提高到594.57±28.05 mg/g。(4)PMFs單體的制備及鑒定:應(yīng)用質(zhì)譜引導(dǎo)的制備型液相色譜對PMFs單體進行同時分離和制備,建立了最佳的液相分離條件:采用XBridge Prep RP18制備柱(19×250 mm,5μm),流動相為0.1%甲酸/乙腈(A)和0.1%甲酸/水(B),流速為20 mL/min,洗脫梯度為0-6 min,18%-30%A;6-35 min,30%-42%A;35-45 min,42%-60%A;45-50 min,60%-18%A。所得單體經(jīng)UPLC-Q-TOF-MS/MS和核磁共振~1H譜、~(13)C譜鑒定其結(jié)構(gòu),結(jié)果表明,從紅橘果皮PMFs粗提物中分離得到了甜橙黃酮、5,6,7,4'-四甲氧基黃酮、川陳皮素、橘皮素和5-羥基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黃酮5種PMFs單體,純度均高于95.3%。
【圖文】：

圖 4-2 提取方法對提取量的影響ig 4-2 Effects of extraction method on extraction rate of TPMF and TF法和超聲提取法的 TPMF 提取量分別為 9.92 ±0.20 mg/g取量分別為 17.65 ± 0.27 mg/g 和 16.77 ± 3.00 mg/g。兩相近，而超聲提取所用的時間（約 1.5 h）相較于振蕩浸輔助明顯提高了提取效率。因此，后續(xù)提取方法選擇超聲劑為 1:20、超聲時間為 20min、提取次數(shù)為 2 次、提取溫度為劑水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷（極性從和 TFLA 提取量的影響，結(jié)果如圖 4-3 所示。

注：相同顏色的柱上小寫字母代表相互之間的差異顯著性（p < 0.05）。圖 4-3 提取溶劑對 TPMF 和 TFLA 的提取量 Effect of extraction solvent type on the extraction yield of TPMF a小節(jié)中的實驗方法，，測定不同溶劑提取所得的浸膏量，表 4-5 可知，甲醇、乙醇和丙酮的 TPMF 提取量無顯著，但甲醇的 TFLA 提取量和浸膏提取量均顯著高于其他效提取紅橘果皮中的 PMFs，同時也提取到了較多的黃質(zhì)提取量較高時，會增加后續(xù)純化 PMFs 的負擔(dān)。丙酮顯著低于乙醇，但考慮到丙酮的毒性和環(huán)境污染性，且最佳提取溶劑。表 4-5 提取溶劑對浸膏提取量的影響Table 4-5 Effect of extraction solvent type on the extract weight提取溶劑Solvent type浸膏提取量（mg/g）The extract weight水 417.6 9.4b
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S666

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本文編號：2681876