【摘要】：本研究以4個(gè)柑橘品種(‘大紅袍’紅橘、‘紐荷爾’臍橙、‘尤力克’檸檬和‘梁平’柚)的果實(shí)為實(shí)驗(yàn)材料,采用超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(Ultra performance liquidchromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS/MS)對(duì)其果皮和果肉中主要的類(lèi)黃酮進(jìn)行測(cè)定;選取多甲氧基黃酮(Polymethoxyflavones,PMFs)含量最豐富的紅橘果皮為材料,優(yōu)化了總多甲氧基黃酮(TPMF)的提取條件;利用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)PMFs粗提物中的TPMF進(jìn)行富集純化,并應(yīng)用質(zhì)譜引導(dǎo)的制備型高效液相色譜同時(shí)分離了多種PMFs單體。主要研究?jī)?nèi)容如下:(1)4個(gè)柑橘品種果實(shí)中主要類(lèi)黃酮的測(cè)定:采用UPLC-Q-TOF-MS/MS對(duì)4種柑橘果實(shí)中主要類(lèi)黃酮成分進(jìn)行測(cè)定,鑒定出16種主要的類(lèi)黃酮,包括7種黃烷酮和9種PMFs�？疾炝嘶赨PLC-PDA的柑橘類(lèi)黃酮含量測(cè)定法,16種類(lèi)黃酮的線性關(guān)系均良好,檢出限和定量限分別小于0.7167和1.7917μg/mL,日內(nèi)和日間精密度分別為0.70%-1.07%和0.38%-1.67%,加標(biāo)回收率為92.95%-105.71%,該方法準(zhǔn)確可靠、適用性良好�；谠摲椒�,本研究比較了柑橘不同品種、不同采樣地點(diǎn)和不同果實(shí)部位中類(lèi)黃酮的分布,結(jié)果表明:‘大紅袍’紅橘中的PMFs種類(lèi)及TPMF含量均優(yōu)于其它三個(gè)品種,PMFs僅在果皮中有檢出,而果肉無(wú)檢出。(2)PMFs提取條件的優(yōu)化:以‘大紅袍’紅橘果皮為實(shí)驗(yàn)材料,利用單因素實(shí)驗(yàn)研究各提取因素(提取方式、提取溶劑、料液比、溫度、時(shí)間和提取次數(shù))對(duì)TPMF提取量的影響,并通過(guò)響應(yīng)面設(shè)計(jì)進(jìn)一步優(yōu)化提取條件。獲得的最佳提取條件為:超聲波輔助提取TPMF,液料比1:20,提取溶劑為89.1%乙醇/水溶液,提取溫度40.9℃,單次提取時(shí)間為34.1 min,重復(fù)提取2次,在此條件下紅橘果皮的TPMF提取量為11.09 mg/g DW。(3)PMFs富集純化方法的建立:以‘大紅袍’紅橘果皮提取所得的PMFs粗提物為材料,比較了8種大孔吸附樹(shù)脂(HPD100、HPD300、HPD400、HPD600、NKA-9、D101、DM130和AB-8)對(duì)TPMF的靜態(tài)吸附和解吸能力,結(jié)果表明:HPD300型大孔樹(shù)脂對(duì)TPMF的富集效果最佳。對(duì)HPD300型樹(shù)脂吸附TPMF的吸附動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)研究發(fā)現(xiàn),該樹(shù)脂對(duì)TPMF的吸附過(guò)程符合準(zhǔn)二級(jí)吸附模型和Langmuir方程,吸附速率主要受液膜擴(kuò)散控制。基于動(dòng)態(tài)吸附和解吸附的單因素實(shí)驗(yàn),分析得出富集純化TPMF的最佳工藝為:以TPMF濃度為8.70 mg/mL的粗提液上樣,上樣流速4.0 BV/h,上樣體積11 BV;用7%乙醇溶液預(yù)先洗脫6 BV進(jìn)行除雜,再以90%乙醇水溶液為洗脫液,洗脫流速4.0 BV/h,洗脫體積4 BV。經(jīng)HPD300型樹(shù)脂富集純化后,干燥狀態(tài)下PMFs粗提物中的TPMF含量由31.720±1.255 mg/g提高到594.57±28.05 mg/g。(4)PMFs單體的制備及鑒定:應(yīng)用質(zhì)譜引導(dǎo)的制備型液相色譜對(duì)PMFs單體進(jìn)行同時(shí)分離和制備,建立了最佳的液相分離條件:采用XBridge Prep RP18制備柱(19×250 mm,5μm),流動(dòng)相為0.1%甲酸/乙腈(A)和0.1%甲酸/水(B),流速為20 mL/min,洗脫梯度為0-6 min,18%-30%A;6-35 min,30%-42%A;35-45 min,42%-60%A;45-50 min,60%-18%A。所得單體經(jīng)UPLC-Q-TOF-MS/MS和核磁共振~1H譜、~(13)C譜鑒定其結(jié)構(gòu),結(jié)果表明,從紅橘果皮PMFs粗提物中分離得到了甜橙黃酮、5,6,7,4'-四甲氧基黃酮、川陳皮素、橘皮素和5-羥基-6,7,8,3',4'-五甲氧基黃酮5種PMFs單體,純度均高于95.3%。
【圖文】：

圖 4-2 提取方法對(duì)提取量的影響ig 4-2 Effects of extraction method on extraction rate of TPMF and TF法和超聲提取法的 TPMF 提取量分別為 9.92 ±0.20 mg/g取量分別為 17.65 ± 0.27 mg/g 和 16.77 ± 3.00 mg/g。兩相近，而超聲提取所用的時(shí)間（約 1.5 h）相較于振蕩浸輔助明顯提高了提取效率。因此，后續(xù)提取方法選擇超聲劑為 1:20、超聲時(shí)間為 20min、提取次數(shù)為 2 次、提取溫度為劑水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷（極性從和 TFLA 提取量的影響，結(jié)果如圖 4-3 所示。

注：相同顏色的柱上小寫(xiě)字母代表相互之間的差異顯著性（p < 0.05）。圖 4-3 提取溶劑對(duì) TPMF 和 TFLA 的提取量 Effect of extraction solvent type on the extraction yield of TPMF a小節(jié)中的實(shí)驗(yàn)方法，，測(cè)定不同溶劑提取所得的浸膏量，表 4-5 可知，甲醇、乙醇和丙酮的 TPMF 提取量無(wú)顯著，但甲醇的 TFLA 提取量和浸膏提取量均顯著高于其他效提取紅橘果皮中的 PMFs，同時(shí)也提取到了較多的黃質(zhì)提取量較高時(shí)，會(huì)增加后續(xù)純化 PMFs 的負(fù)擔(dān)。丙酮顯著低于乙醇，但考慮到丙酮的毒性和環(huán)境污染性，且最佳提取溶劑。表 4-5 提取溶劑對(duì)浸膏提取量的影響Table 4-5 Effect of extraction solvent type on the extract weight提取溶劑Solvent type浸膏提取量（mg/g）The extract weight水 417.6 9.4b
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S666

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本文編號(hào)：2681876