【摘要】：百合具有重要的觀賞、食用和藥用價(jià)值,其市場(chǎng)需求與發(fā)展前景十分廣闊。我國雖然擁有豐富而寶貴的野生百合種質(zhì)資源,但目前并未得到充分的保護(hù)和開發(fā)利用,缺乏系統(tǒng)的繁殖體系和具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的百合新品種。利用組織培養(yǎng)繁殖技術(shù),不僅可以解決百合傳統(tǒng)繁殖中的脫毒及退化問題,為百合現(xiàn)代化生產(chǎn)提供一條快速穩(wěn)定的繁殖途徑,更可為種質(zhì)保存及基因工程研究奠定基礎(chǔ)。株高作為影響百合切花品質(zhì)和盆栽應(yīng)用形式的一個(gè)重要因素,近年來逐漸受到育種工作者的關(guān)注�；蚬こ碳夹g(shù)的發(fā)展,為百合株高育種提供了新的途徑,分離驗(yàn)證與百合株高相關(guān)的基因是實(shí)現(xiàn)該目標(biāo)的前提。本研究以我國21種野生百合及‘索邦’鱗莖為材料,對(duì)組培再生體系建立中滅菌方法、植物生長(zhǎng)添加劑、外植體類型和培養(yǎng)條件等進(jìn)行了研究,建立了野生百合高效快繁體系。另外,為研究百合株高調(diào)控機(jī)理,從‘索邦’葉片中分離出編碼活性GAs合成過程中雙加氧酶的基因GA20ox,并對(duì)該基因的表達(dá)模式進(jìn)行了分析。主要結(jié)果如下:1.采用0.2%升汞對(duì)卷丹鱗片消毒的結(jié)果表明滅菌7 min效果最佳。參照卷丹鱗莖的幼嫩程度及其最佳升汞消毒時(shí)間,對(duì)其它百合的消毒時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn),成功誘導(dǎo)了另外21種百合鱗片的再生,但文山百合、‘索邦’、宜昌百合和蘭州百合等再生狀況較差,表明根據(jù)鱗莖幼嫩程度確定的升汞消毒時(shí)間對(duì)成功誘導(dǎo)鱗片再生有一定的效果,但外植體再生狀況的改善不能單純依賴消毒時(shí)間的調(diào)整。2.卷丹鱗片最適不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA,誘導(dǎo)系數(shù)為2.09;最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L~(-1) PIC,誘導(dǎo)率為86.66%。歐洲百合鱗片最適不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA,誘導(dǎo)系數(shù)為2.50;最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.2 mg·L~(-1) TDZ+0.5 mg·L~(-1) NAA,誘導(dǎo)率為77.14%。采用三因素方差分析影響20種百合誘導(dǎo)再生的因素,結(jié)果表明6-BA濃度對(duì)百合再生能力的影響協(xié)同基因型和外植體類型差異而有所不同,并且不同百合再生能力差異較大,鱗片再生能力強(qiáng)于葉片。3.歐洲百合愈傷增殖適宜于暗培養(yǎng);最適增殖培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.1mg·L~(-1) NAA,增殖指數(shù)為2.93;分化適宜于暗培養(yǎng),芽再生系數(shù)為5.43。瀘定百合愈傷增殖適宜于光培養(yǎng);最適增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA,增殖指數(shù)為3.10;分化適宜于光培養(yǎng),芽再生系數(shù)為2.67。運(yùn)用兩因素方差分析影響11種百合愈傷增殖和分化的因素,表明基因型和光暗培養(yǎng)條件對(duì)愈傷增殖指數(shù)和分化系數(shù)存在交互作用和單因素主效應(yīng),并對(duì)愈傷和芽的生長(zhǎng)狀態(tài)產(chǎn)生不同的影響。4.已完成18種百合不定芽在培養(yǎng)基MS+0.1 mg·L~(-1) NAA+6%蔗糖的生根培養(yǎng)中,生根率均達(dá)100%,總體生根狀況良好。鱗莖膨大效果差異較大,與鱗莖增殖個(gè)數(shù)顯著負(fù)相關(guān)。完整無菌苗移栽成活率達(dá)90%以上,生長(zhǎng)狀況良好。5.利用RACE技術(shù)獲得‘索邦’GA20ox的cDNA全長(zhǎng)序列1 502 bp,開放閱讀框?yàn)? 167 bp,編碼388個(gè)氨基酸�！靼睢疓A20ox和其他物種的GA20ox蛋白有很高的相似性,均含有保守的PLN02276結(jié)構(gòu)域,與姬蝴蝶蘭和鐵皮石斛等單子葉植物的GA20ox蛋白具有較高的同源性。6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,‘索邦’GA20ox在各部位的表達(dá)與生長(zhǎng)發(fā)育密切聯(lián)系,具有一定的時(shí)空特異性。200 mg·L~(-1) GA_3對(duì)萌芽期‘索邦’的處理最有利于株高的增加,并在不同程度上抑制了GA20ox在多組織器官中的表達(dá)。推測(cè)GA20ox的表達(dá)受活性GAs的反饋調(diào)節(jié),這種調(diào)節(jié)機(jī)制在維持體內(nèi)活性GAs穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用。
【圖文】：

periodB1 √ 0.00 0.00 0.90±0.13d 0.00cB2 √ 0.50 0.10 2.07±0.25b 32.51±11.95abB3 √ 1.00 0.10 1.53±0.27c 26.97±8.96abB4 √ 2.00 0.10 2.50±0.37a 44.43±7.87aB5 √ 0.50 0.50 1.44±0.42c 16.68±11.77bcB6 √ 1.00 0.50 1.33±0.21c 22.22±12.40bB7 √ 2.00 0.50 0.71±0.07d 41.67±15.96aB8 √ 0.00 0.00 1.09±0.23c 0.00cB9 √ 0.50 0.20 1.46±0.25bc 77.14±7.00aB10 √ 0.50 0.60 1.57±0.26b 48.57±7.00bB11 √ 1.00 0.20 1.74±0.23ab 45.72±5.71bB12 √ 1.00 0.60 2.00±0.31a 68.57±14.00aB13 √ 0.00 0.00 1.09±0.23b 0.00dB14 √ 0.20 0.01 1.13±0.29ab 63.34±6.67abB15 √ 0.60 0.01 0.69±0.22c 66.67±7.03aB16 √ 0.20 0.10 1.49±0.26a 34.44±11.33cB17 √ 0.60 0.10 1.16±0.21ab 54.45±7.37b

圖 2-3 歐洲百合和瀘定百合愈傷組織的增殖和分化) 在暗培養(yǎng)條件下增殖的歐洲百合愈傷；(B), (F) 在光培養(yǎng)條件下增殖的歐洲百合愈傷養(yǎng)條件下增殖的瀘定百合愈傷；(D), (H) 在光培養(yǎng)條件下增殖的瀘定百合愈傷；(I)-(M下歐洲百合體胚的發(fā)育過程；(N) 光培養(yǎng)條件下歐洲百合愈傷的再生；(O) 光培養(yǎng)條定百合愈傷組織分化的不定芽；(P) 暗培養(yǎng)條件瀘定百合愈傷組織分化的不定芽Fig. 2-3 The callus proliferation and differentiation of L. martagon and L. sargentiaeE) Callus of L. martagon proliferation in the dark; (B), (F) Callus proliferation of L. martago-h light/dark photoperiod; (C), (G) Callus of L. sargentiae proliferation in the dark; (D), (H) liferation of L. sargentiae under 16/8-h light/dark photoperiod; (I)-(M) Developmental proceatic embryos generated from callus of L. martagon cultured in the dark; (N) Embryo-like struned from callus of L. martagon under 16/8-h light/dark photoperiod; (O) Callus differentiatiogentiae under 16/8-h light/dark photoperiod; (P) Callus differentiation of L. sargentiae in the2 光暗培養(yǎng)條件對(duì)歐洲百合和瀘定百合愈傷組織分化的影響歐洲百合和瀘定百合的愈傷組織接種于 MS 培養(yǎng)基，，分別置于光培養(yǎng)和暗
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S682.29

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2675216