【摘要】：目前,我國(guó)柑橘產(chǎn)業(yè)亟待解決的問(wèn)題之一是果實(shí)熟期集中,早、晚熟品種少,熟期結(jié)構(gòu)的不合理嚴(yán)重降低了我國(guó)柑橘的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。如何通過(guò)分子手段調(diào)控柑橘果實(shí)熟期,解析果實(shí)成熟機(jī)理對(duì)發(fā)展柑橘產(chǎn)業(yè)意義重大。前人通過(guò)對(duì)奉節(jié)臍橙及其晚熟芽變進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,篩選到與果實(shí)成熟相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子CsMYB77和CsMYB21,將這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)入番茄中進(jìn)行功能驗(yàn)證。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上,對(duì)T1和T2代超表達(dá)CsMYB77和CsMYB21的番茄果實(shí)進(jìn)行功能驗(yàn)證,確定了轉(zhuǎn)錄因子在果實(shí)成熟過(guò)程中的功能。主要研究結(jié)果如下:1、對(duì)T1代超表系番茄進(jìn)行表型觀察與統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)與野生型(WT)和空載對(duì)照(Control)相比,超表系果實(shí)的破色時(shí)間晚3-6天。對(duì)所有超表達(dá)CsMYB77和CsMYB21的株系進(jìn)行目的基因表達(dá)分析,各株系選擇一株果實(shí)種子進(jìn)行T2代播種。2、對(duì)T2代超表系番茄進(jìn)行表型觀察與統(tǒng)計(jì),與Control相比,超表系果實(shí)的破色天數(shù)都顯著變晚,果實(shí)整體的破色時(shí)間向后延遲3-6天,與WT相比,只有MYB77 1-3一個(gè)超表系果實(shí)的破色天數(shù)顯著晚于野生型。對(duì)T2代番茄果實(shí)進(jìn)行成熟相關(guān)的生理指標(biāo)檢測(cè),乙烯釋放速率檢測(cè)結(jié)果顯示,野生型和空載對(duì)照果實(shí)在34DAF時(shí)乙烯釋放速率開始增加,在39 DAF達(dá)到釋放高峰,而超表系在39 DAF時(shí)乙烯釋放速率才開始增加,在42 DAF或者45 DAF達(dá)到釋放高峰。高效液相色譜檢測(cè)果實(shí)中番茄紅素的結(jié)果顯示,26 DAF時(shí)野生型、空載對(duì)照和超表系果實(shí)中均沒(méi)有檢測(cè)到番茄紅素的存在,36 DAF時(shí)野生型和對(duì)照果實(shí)中番茄紅素開始積累,超表系在39 DAF時(shí)才開始有番茄紅素的積累。以上結(jié)果說(shuō)明,超表達(dá)CsMYB77和CsMYB21的番茄果實(shí)較野生型和空載對(duì)照果實(shí)破色變晚,即延遲了果實(shí)的成熟進(jìn)程。3、對(duì)成熟相關(guān)基因進(jìn)行表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),乙烯合成基因SlACS4和SlACO1,八氫番茄紅素合成基因SlPSY1,成熟調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子SlRIN和SlNOR的表達(dá)水平在野生型和空載對(duì)照中從36 DAF開始增加。超表系中,39 DAF時(shí)這些成熟相關(guān)基因的表達(dá)才開始增長(zhǎng),這與之前果實(shí)著色的統(tǒng)計(jì)結(jié)果和生理指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果一致,說(shuō)明超表達(dá)CsMYB77和CsMYB21的番茄果實(shí)能夠延遲成熟3天左右。
【圖文】：

技術(shù)路線圖

（MYB77-OE） 、CsMYB21（MYB21-OE）的 Mic-Tom 番茄。2.1.2 主要試劑ExTaq 酶和 Trizol 購(gòu)自大連 Takara 公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒 HiFiScript gDNARemoval cDNA Synthesis Kit 購(gòu)于北京康為世紀(jì)，Applied Biosystems PowerUp SYBR Green 預(yù)混液購(gòu)于賽默飛世爾公司，所用引物由武漢天一輝遠(yuǎn)公司合成。2.2 方法2.2.1 番茄表型統(tǒng)計(jì)觀察2.2.1.1 番茄開花到果實(shí)著色時(shí)間統(tǒng)計(jì)番茄材料開花后，，選取盛花期花朵人工掛牌并標(biāo)注日期（圖 2-1），選擇與圖中 12.6 形態(tài)一致的花朵作為番茄的盛花期即 0 DAF 進(jìn)行掛牌。統(tǒng)計(jì)野生型、空載對(duì)照及轉(zhuǎn)基因材料從盛花到果實(shí)開始著色所需時(shí)間，即破色天數(shù)。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S666

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