【摘要】：藍靛果果實中含有豐富的花青苷,花青苷是植物體內(nèi)重要的次生代謝產(chǎn)物,并具有抗氧化活性,能夠清除自由基、抗腫瘤,極大有益于人體健康。因此,藍靛果果實既有藥用價值、又有營養(yǎng)價值及食用價值。研究其果實成熟過程中花青苷合成的分子調(diào)控機制,可為培育和篩選高含量花青苷的藍靛果品種提供理論依據(jù)。本研究分別以不同品種的藍靛果果實為材料,從生理、分子及生物信息學(xué)分析多個層面綜合分析藍靛果果實成熟過程中花青苷積累的機制,獲得如下結(jié)果:采用溶劑浸提法并結(jié)合pH示差法檢測了“6號”和“9號”兩個品種藍靛果果實中的花青苷含量,結(jié)果均表現(xiàn)為隨著果實成熟而逐漸增加的趨勢,且兩個品種成熟期的花青苷含量分別為:253.73 mg/100 g、75.24 mg/100 g,“6號”高于“9號”。結(jié)合結(jié)構(gòu)基因的表達量、花青苷積累量綜合分析,對花青苷積累起關(guān)鍵作用的ANS、UFGT的酶。采用ELISA試劑盒對ANS、UFGT進行酶活性檢測。結(jié)果表明不同品種的藍靛果果實中ANS酶均保持較高的活性。利用熒光定量PCR技術(shù)重點對“6號”和“9號”果實成熟過程中不同階段的調(diào)節(jié)基因MYB、bHLH和WD40進行了表達量分析,結(jié)果表明“6號”和“9號”品種中的MYB在不同時期的相對表達量呈現(xiàn)先下降后上升的規(guī)律,表達總體趨勢與花青苷積累趨勢相反,它可能抑制了花青苷積累。bHLH在兩個品種不同時期的相對表達量均呈現(xiàn)先下降后上升再下降的規(guī)律。WD40的表達量除了“9號”品種3期外,在兩個品種的果實發(fā)育初期至成熟階段的表達量均呈上調(diào)趨勢,說明WD40隨著果實成熟促進了花青苷積累。結(jié)果表明大部分的調(diào)節(jié)基因的高效表達是在藍靛果果實著色至成熟的階段。以已知物種相關(guān)基因序列為參考,設(shè)計引物,對花青苷合成相關(guān)的調(diào)節(jié)基因WD40進行完整CDS區(qū)克隆及生物信息學(xué)分析。理化性質(zhì)分析表明,該核酸序列全長1230 bp,編碼409個氨基酸,屬于親水、膜外蛋白。經(jīng)序列分析及同源性比對證明克隆序列是WD40。采用高通量測序的方法對“6號”品種的果實進行miRNA測序及生物信息學(xué)分析,共鑒定出507條miRNA,其中新的16條,保守的491條,篩選出9條與花青苷合成相關(guān)的miRNA,qRT-PCR對表達量較高的miRNA及它們的靶基因進行定量分析,研究發(fā)現(xiàn)miR156h-3p、miR396a-3p與靶基因UFGT的表達呈負(fù)相關(guān),進一步明確了藍靛果果實中花青苷合成相關(guān)的關(guān)鍵miRNA。
【圖文】：

果實的細(xì)胞液呈堿性時顏色偏藍，予植物組織紅、藍、紫色特征的類黃酮次級代謝類黃酮特有的 C3-C6-C3 骨架，見圖 1-1，與其害的侵襲。果實中常見花青素主要分為以下六種表 1-1 常見花青素的種類[4]R2 花青素（anthocyaniH 天竺葵色素（PelargoOH 飛燕草色素（DelphinH 矢車菊色素（CyaniOH 牽牛花色素（PetudH 芍藥色素(PeonidOCH3 錦葵色素(malvid表示在圖 1-1 所示結(jié)構(gòu)上不同基團的取代情況。

哈爾濱工業(yè)大學(xué)工學(xué)碩士學(xué)位論文青苷生物合成相關(guān)的調(diào)節(jié)基因研究概況苷生物合成過程主要受到結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因這兩類基因的調(diào)苷生物合成的結(jié)構(gòu)基因包括苯丙氨酸氨裂解酶（PAL），查爾，，查耳酮黃烷酮異構(gòu)酶（CHI），肉桂酸-4-羥化酶（C4H），4接酶（4CL），黃烷酮-3-羥化酶（F3H），類黃酮 3’-羥化酶（醇 4-還原酶（DFR），類黃酮 3-O-葡糖基轉(zhuǎn)移酶（UFGT）以及NS）等�；ㄇ嘬丈锖铣赏緩揭妶D 1-2[7]。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S663.9

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