【摘要】：內(nèi)參基因?qū)脤?shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)進(jìn)行基因表達(dá)分析時(shí)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化至關(guān)重要。在本研究中,參考植物中傳統(tǒng)內(nèi)參基因,并結(jié)合蔓越橘果實(shí)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從中選擇了肌動(dòng)蛋白(ACTIN),親環(huán)素類(CYP 2),延長因子1α(EF-1α),F-box蛋白家族(F-box),3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH),β微管蛋白(TUBB),sand家族蛋白(SAND),18S核糖體RNA(18s rRNA),蛋白磷酸酶2A調(diào)節(jié)亞基(PP2A)和RH 8十個(gè)候選內(nèi)參基因分別進(jìn)行qRT-PCR,同時(shí)利用三種統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件(geNorm,NormFinder和Bestkeeper)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,評(píng)估了各候選內(nèi)參基因分別在蔓越橘處于不同試驗(yàn)因素影響下的表達(dá)穩(wěn)定性(不同栽培品種的蔓越橘;蔓越橘的不同組織;鹽脅迫處理的蔓越橘;堿脅迫處理的蔓越橘;PEG模擬干旱脅迫處理的蔓越橘)。得到的主要結(jié)果為:1.在不同品種的蔓越橘中,PP2A是作為單個(gè)內(nèi)參基因的最佳選擇,PP2A+SAND是作為內(nèi)參基因組合的最佳選擇;18S rRNA是該樣品集合中表達(dá)水平最不穩(wěn)定的候選內(nèi)參基因。2.在蔓越橘的不同組織中,SAND是作為單個(gè)內(nèi)參基因的最佳選擇,PP2A+SAND是最佳的內(nèi)參基因組合;ACTIN是該樣品集合中表達(dá)水平最不穩(wěn)定的候選內(nèi)參基因。3.在蔓越橘遭受非生物脅迫時(shí):鹽脅迫處理的蔓越橘中PP2A和CYP 2都可以作為單個(gè)內(nèi)參基因的最佳選擇;堿脅迫處理的蔓越橘中PP2A是作為單個(gè)內(nèi)參基因的最佳選擇;PEG模擬干旱脅迫處理的蔓越橘和非生物脅迫處理的蔓越橘中SAND都是作為單個(gè)內(nèi)參基因的最佳選擇;PP2A+SAND是蔓越橘在遭受上述非生物脅迫條件時(shí)最優(yōu)秀的內(nèi)參基因組合;當(dāng)蔓越橘遭受非生物脅迫時(shí),GAPDH的表達(dá)水平在蔓越橘處于非生物脅迫時(shí)無法保持穩(wěn)定狀態(tài)。綜合所有供試材料作為一個(gè)樣本集合來進(jìn)行數(shù)據(jù)分析時(shí),不能準(zhǔn)確篩選出穩(wěn)定表達(dá)的單個(gè)內(nèi)參基因或內(nèi)參基因組合。綜上所述,建議針對(duì)特定的試驗(yàn)條件選擇合適的內(nèi)參基因或內(nèi)參基因組合進(jìn)行數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化,以期獲得可靠的基因表達(dá)分析的結(jié)果。本研究首次結(jié)合蔓越橘轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選出不同試驗(yàn)條件下的蔓越橘中合適的內(nèi)參基因,為研究特定試驗(yàn)條件下蔓越橘的基因表達(dá)分析、揭示蔓越橘生物學(xué)特性以及蔓越橘遺傳育種等方面的研究奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

蔓越橘總RNA的1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)（M：10000bpDNAMarker；1~17：隨機(jī)抽取參試蔓越橘樣本的總RNA）

蔓越橘10個(gè)候選內(nèi)參因引物PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)（M：DL2000marker、1：ACTIN、2：CYP2、3：EF-1α、4：F-box、5：GAPDH、6：18SrRNA、7：
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S663.9

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本文編號(hào)：2655413