【摘要】：硒作為一種自然界中存在量較少但又不可或缺的微量元素,對世界范圍內(nèi)的生物具有重要意義。富硒食品是一種方便有效的方法,可直接補(bǔ)充人體內(nèi)的硒,并利用外源性硒肥培育富硒作物。植物可以有效將硒通過自身生長代謝與吸收轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒化合物。本研究以土壤富硒葡萄為研究樣品,研究硒對葡萄吸收轉(zhuǎn)化效果及其生物活性;選取微波密閉消解-氫化物發(fā)生原子熒光分光光譜(HG-AFS)法對富硒葡萄中硒元素進(jìn)行分析;采用紫外可見分光光譜法(UV)研究富硒葡萄中硒蛋白、硒多糖等含硒化合物的抗氧化、清除自由基等生物活性;采用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)法研究硒對葡萄中鐵(Fe)、鈣(Ca)等16種元素的促進(jìn)或拮抗作用;采用高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-ESI-MS)聯(lián)用技術(shù)對富硒葡萄中有機(jī)硒、無機(jī)硒等硒的不同形態(tài)進(jìn)行分析研究。得出結(jié)果如下:1.在土壤噴灑硒肥范圍(20 mg/L-200 mg/L)內(nèi),沒有出現(xiàn)中毒現(xiàn)象,說明噴硒量處于葡萄的耐受范圍。本研究采用微波密閉消解與HG-AFS技術(shù),對富硒葡萄內(nèi)總硒含量進(jìn)行分析。結(jié)果表明,葡萄中總硒含量為165.64-480.32 ug/kg,是對照組的22-67倍,說明葡萄能夠有效富集施加在土壤的無機(jī)硒肥。2.選擇超純水、HCl、NaOH、NaCl、PBS和Tris-HCl作為浸提劑,對富硒葡萄中可溶態(tài)硒進(jìn)行分析,研究獲得富硒葡萄中不同溶解態(tài)硒的分布情況:NaOH態(tài)HCl態(tài)H_2O態(tài)NaCl態(tài)Tris-HCl態(tài)PBS態(tài),得出在堿溶態(tài)下葡萄中的硒遷移轉(zhuǎn)化能力及硒的可吸收利用性最強(qiáng)。3.單因素實(shí)驗(yàn)獲得富硒葡萄中可溶性蛋白的最佳條件是:NaOH濃度為0.1mol/L、料液比為1:15、提取時(shí)間90 min、提取溫度40℃。最佳條件下,富硒葡萄中可溶性蛋白含量最高的施硒梯度為160 mg/L,樣品中可溶性蛋白含量為16.78 mg/g。當(dāng)施硒梯度增高,富硒葡萄蛋白硒的含量亦增大,最高為44.14μg/kg。4.單因素實(shí)驗(yàn)獲得富硒葡萄中可溶性多糖的最優(yōu)條件是:料液比1:20,浸提時(shí)間90 min,浸提溫度75℃。最優(yōu)條件下各施硒梯度富硒葡萄中可溶性多糖含量最高的梯度為160 mg/L,可溶性多糖含量為455.92 mg/g。結(jié)果表明,當(dāng)施硒梯度變化,富硒葡萄中多糖硒亦增加,當(dāng)施用的硒量為200 mg/L時(shí),多糖的最大硒含量達(dá)到134.50μg/kg,且樣品中多糖硒的分布要優(yōu)于蛋白硒。5.在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),基于富硒葡萄中多糖的硒結(jié)合能力和還原力等生物活性都大于硒蛋白,硒多糖、硒蛋白均在施硒梯度處于160 mg/L時(shí)活性處于最大值,對生產(chǎn)具有抗氧化活性的富硒葡萄具有明顯的指導(dǎo)性,且葡萄內(nèi)硒多糖還原能力明顯優(yōu)于硒蛋白。6.采用ICP-MS法對富硒葡萄中16種元素進(jìn)行定量分析。研究得到,不同富硒梯度樣品中16種元素呈現(xiàn)各自變化趨勢。隨著噴硒濃度的逐漸增加,Cu、Mg、Cr、Hg元素受硒的生物作用不明顯;Mo、V、Mn、Zn、Ca元素的含量有促進(jìn)作用;硒對重金屬元素如Co、Ag、As、Pb具有顯著的抑制作用。7.采用HPLC-ESI-MS聯(lián)用技術(shù),定性且定量地分析富硒葡萄中有機(jī)硒與無機(jī)硒。優(yōu)化酶解葡萄中硒蛋白的條件,獲得硒代氨基酸。選擇MRM模式進(jìn)行監(jiān)測,結(jié)果表明,富硒葡萄中存在大量硒代氨基酸。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),富硒葡萄中硒代氨基酸含量呈現(xiàn)上升趨勢,并在施硒濃度為160 mg/L時(shí)處于最大量,SeCys_2,Se-Met,Se-MeSeCys的峰值分別為4.52,16.51,3.87 ug/kg。而無機(jī)硒不存在于富硒葡萄內(nèi)。說明葡萄可以從施加硒肥的土壤中吸收硒元素并有將無機(jī)硒通過自身代謝機(jī)制將其轉(zhuǎn)化為無毒的有機(jī)硒,因此,將富硒葡萄作為日常硒補(bǔ)劑十分安全可靠。
【圖文】：

7圖 1-1 富硒葡萄樣品的培育與采集土壤采自培育富硒葡萄的試驗(yàn)田，在每小區(qū)內(nèi)采用五點(diǎn)取樣法采集試驗(yàn)田0-10 cm 深處的土壤。土壤樣品經(jīng)風(fēng)干后，，研堝碾碎過 80 目篩網(wǎng)去除粗大顆粒泥沙，而后過 100 目篩網(wǎng)留存過篩網(wǎng)后顆粒，均勻且細(xì)膩的土壤泥沙為研究樣品，最后將所得土壤樣品密封并在室溫下的陰涼干燥處保存待用。1.2.3 富硒葡萄樣品與施硒土壤的前處理本研究中選取優(yōu)級純硝酸（HNO3）作為富硒葡萄微波消解的消解試劑。精確稱取 0.2 g 富硒葡萄粉末，加入 5 mL HNO3，按表 1-2 的消解程序進(jìn)行消解。

原子化器高度輔陰極電流8 mm40 mA載氣流量屏蔽氣流量延遲時(shí)間讀數(shù)方式總電流測定方式400 mL/min1000 mL/min1.6 s峰面積80 mA標(biāo)準(zhǔn)曲線法 結(jié)果與討論.1 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng) 1.2.5 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得的數(shù)據(jù)制作硒標(biāo)準(zhǔn)曲線，在 0-50 ug/L 范圍內(nèi).54 %，方法檢出限為 0.79 ug/L。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S663.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2632180