【摘要】：甜瓜(Cucumis melo L.),葫蘆科重要的經(jīng)濟(jì)作物,具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì),多年來國(guó)內(nèi)外的研究學(xué)者和育種工作者先后培育了大批量?jī)?yōu)良的甜瓜雜種一代種子,創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟(jì)效益。但是目前雜交制種仍然延續(xù)人工摘除母本雄花、人工授粉、套袋等措施,工序復(fù)雜、工作量大、成本高,容易造成花器官的損傷,從而造成產(chǎn)量的下降。雄性不育的利用可以降低育種成本,但是需要等到植株開花后才能鑒定,因此尋找甜瓜雄性不育苗期鑒定方法是降低育種成本增加經(jīng)濟(jì)效益的途徑之一。因此本研究利用細(xì)胞核雄性不育ms-5與黑龍江省薄皮甜瓜品系HM1-1配置雜交組合,獲得F1、F2及回交群體,分析該雄性不育性狀的遺傳規(guī)律,結(jié)合SLAF-Seq-BSA測(cè)序技術(shù)尋找與甜瓜雄性不育性狀連鎖的分子標(biāo)記,通過分子標(biāo)記輔助選擇育種的途徑獲得早期鑒定雄性不育的方法,利用與雄性不育連鎖的標(biāo)記對(duì)34種甜瓜材料進(jìn)行苗期鑒定,結(jié)合田間表型性狀探索雄性不育苗期鑒定方法的準(zhǔn)確性,結(jié)果如下:本研究以甜瓜ms-5和HM1-1各30株為親本配置雜交組合,得到F1群體,將F1群體自交得到650株F2分離群體,以ms-5及HM1-1分別為輪回親本與F1回交于2015年獲得172株BC1P1和70株BC1P2群體。經(jīng)育性調(diào)查和卡方測(cè)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),甜瓜雄性不育ms-5遺傳規(guī)律符合孟德爾遺傳規(guī)律,該雄性不育基因由一對(duì)單隱性核基因控制。利用SLAF-Seq-BSA測(cè)序技術(shù),在甜瓜第九條染色體上的4,304,282(起始基因位置)到6,053,037(結(jié)束基因位置)位置開發(fā)設(shè)計(jì)127對(duì)CAPS引物,經(jīng)篩選得到29對(duì)在親本、F1和F2分離群體中多態(tài)性較好的CAPS標(biāo)記,多態(tài)率22.83%。經(jīng)CAPS連鎖標(biāo)記挖掘,找到與ms-5相關(guān)聯(lián)的兩個(gè)分子標(biāo)記:BSA3-3和BSA16,與甜瓜雄性不育連鎖距離分別為0.1c M和0.2c M。將基因定位得到的兩個(gè)連鎖分子標(biāo)記BSA3-3和BSA16分別與ms-5、HM1-1、F1和34個(gè)甜瓜材料進(jìn)行分子標(biāo)記的鑒定,將分子標(biāo)記檢測(cè)得到的育性結(jié)果與田間苗期檢測(cè)結(jié)果(醋酸洋紅染色法檢測(cè)花粉育性、人工授粉全雌性甜瓜自交系檢測(cè)育性結(jié)果)相對(duì)比,該分子標(biāo)記檢測(cè)準(zhǔn)確率高達(dá)97%。該試驗(yàn)結(jié)果表明BSA3-3和BSA16兩多態(tài)性標(biāo)記與甜瓜雄性不育基因連鎖,可用于甜瓜品種的苗期鑒定。本試驗(yàn)為田間育種工作者提供室內(nèi)苗期鑒定的方法,縮短育種時(shí)間,為今后甜瓜雄性不育基因克隆提供科學(xué)依據(jù),為甜瓜分子育種奠定科研基礎(chǔ)。
【圖文】：

甜瓜雄性不育苗期早期鑒定方法度約為 69 bp。Q30 都大于 85.07%（Q30 說明堿基識(shí)別精度 99.9%），，測(cè)序雙親品系的 GC含量平均為 36.29%，ms-5 和 HM1-1 總讀取數(shù)分別為 80,896,074 和 87,674,740，ms-5 測(cè)序標(biāo)記平均深度為 28.65X，HM1-1 為 30.12X。雄性不育基因池總數(shù)為 6,779,312，雄性可育基因池總數(shù)為 7,787,845，雄性不育和可育 GC 含量分別為 37.56%和 38.34%,平均值37.94%，雄性不育基因池測(cè)序平均深度為 31.44X，雄性可育基因池為 36.15X。標(biāo)記與參考基因組比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，第九條染色體上發(fā)現(xiàn) 2208 個(gè) SNP 多態(tài)性標(biāo)記，占總標(biāo)記的百分比最大，為 20.33%，甜瓜基因組中的第九條染色體中的四個(gè)區(qū)域被看作是關(guān)聯(lián)區(qū)域，本試驗(yàn)選擇所含標(biāo)記數(shù)量最多的 4,304,282（起始基因位置）到 6,053,037（結(jié)束基因位置）（共1.75 Mb）位置進(jìn)行引物篩選。

圖 3-2 18 對(duì) CAPS 引物在親本間的多態(tài)性篩選Fig3-2 18 CAPS primers screened between parents* M：參考標(biāo)記 2000bp；P1：ms-5；P2：HM1-1* M：DL 2000 DNAmarker；P1：ms-5；P2：HM1-1圖 3-3 具有多態(tài)性的 CAPS 引物（BSA10）在 F2群體中的擴(kuò)增結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S652

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李園園;楊清;嚴(yán)繼勇;陳敏;;洋蔥63A細(xì)胞質(zhì)雄性不育與絨氈層的提早衰退有關(guān)(英文)[J];作物學(xué)報(bào);2006年03期

本文編號(hào)：2611312