細(xì)胞因子是由機(jī)體相關(guān)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的,具有生物調(diào)節(jié)和多種生物學(xué)功能的活性物質(zhì)。近幾十年,國(guó)內(nèi)外學(xué)者熱衷于魚類細(xì)胞因子重組蛋白作為疫苗佐劑研究,結(jié)果顯示許多種重組細(xì)胞因子蛋白如干擾素(IFN)、腫瘤壞死因子(TNF)、粒細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)等,都能不同程度的增加滅活苗、弱毒菌、亞單位疫苗等常規(guī)疫苗的免疫效應(yīng)。它在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答反應(yīng)過程中起重要作用,被公認(rèn)為新型疫苗的較好免疫佐劑。本研究以斑點(diǎn)叉尾鮰白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)基因?yàn)檠芯繉?duì)象,成功克隆并表達(dá)了IL-1β基因重組蛋白；研究了其作為亞單位疫苗佐劑對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的免疫保護(hù)效果。1、斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1 β基因克隆及原核表達(dá)根據(jù)GenBank中公布的斑點(diǎn)叉尾鮰1L-1β1和1L-1β2基因序列(GenBank登錄號(hào)分別為：DQ160229、DQ160230),運(yùn)用生物學(xué)軟件設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得的目的片段IL-1β1和1L-1β2分別克隆至pMD19-T載體；經(jīng)鑒定正確后用BamH I和Xho 1將目的片段從克隆質(zhì)粒上切出,連接到表達(dá)載體pET-32a(+),獲得重組質(zhì)粒pET-32a...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 魚用傳統(tǒng)佐劑的研究現(xiàn)狀
        1.1 油類佐劑
        1.2 礦物質(zhì)類佐劑
        1.3 微生物來源佐劑
        1.4 動(dòng)植物來源佐劑
        1.5 免疫刺激復(fù)合物佐劑
    2. 魚類細(xì)胞因子佐劑
        2.1 細(xì)胞因子佐劑的作用機(jī)制
        2.2 細(xì)胞因子類基因佐劑的優(yōu)越性
        2.3 魚類細(xì)胞因子佐劑研究概況
        2.4 魚類白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)佐劑研究概況
    3. 選題目的意義
第二章 斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1B基因克隆及原核表達(dá)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要儀器
        1.3 質(zhì)粒和菌株
        1.4 主要試劑
        1.5 主要試劑配制
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1β基因的擴(kuò)增
        2.2 IL-1β基因的T克隆
        2.3 T克隆IL-1β基因的鑒定
        2.4 原核表達(dá)載體pET-32a(+)-1β1/1β2的構(gòu)建
        2.5. 原核表達(dá)載體pET-32a(+)-1L-1β1/1β2的表達(dá)
        2.6 重組蛋白IL-1β1/1β2的制備與純化
        2.7 Western-blot檢測(cè)重組蛋白特異性
    3. 結(jié)果
        3.1 斑點(diǎn)叉尾鮰1L-1β1/β2基因的擴(kuò)增、T克隆和鑒定
        3.2 斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1β1/β2基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3 重組質(zhì)粒pET-32a(+)-1L-1β1/β2誘導(dǎo)表達(dá)、條件優(yōu)化及純化
        3.4 Western-blot檢測(cè)重組JL-1β1/β2的特異性
    4. 討論
第三章 重組斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1B作為亞單位疫苗佐劑的免疫效果研究
    1. 試驗(yàn)材料
        1.1 試驗(yàn)菌株
        1.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 主要儀器
        1.4 主要試劑
        1.5 主要試劑和培養(yǎng)基的配制
    2. 試驗(yàn)方法
        2.1 抗原制備
        2.2 免疫
        2.3 采血
        2.4 免疫指標(biāo)檢測(cè)
        2.5 重組蛋白IL-1β1/2對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄影響
        2.6. 實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time)PCR分析
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3. 結(jié)果
        3.1 抗體水平檢測(cè)
        3.2 血清殺菌活性檢測(cè)
        3.3 ACH₅₀活性檢測(cè)
        3.4 血清溶菌酶活力檢測(cè)
        3.5 死亡率和相對(duì)免疫保護(hù)率
        3.6 Real-time PCR分析斑點(diǎn)叉尾鮰IL-1β和TNF-α的轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化
    4. 討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：4015245