TGF-p超家族成員在脊椎動物的生殖、發(fā)育、和生長等方面均具有重要作用。gsdf (gonadal somaderived factor)是TGF-p超家族新成員,以往的研究表明gsdf僅存在于硬骨魚類和腔棘魚類,且主要表達(dá)于性腺。Gsdf功能研究以往多是通過分析其在性腺的表達(dá)模式來推測它對于性別決定與分化的作用,鮮有研究通過缺失功能(loss of function)和獲得功能(gain of function)兩方面研究Gsdf對性別決定與分化的影響。尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)是重要的世界性養(yǎng)殖魚類,具有XX/XY性別決定類型。因易于獲得單性魚苗以及全基因組測序的公開,羅非魚已成為研究魚類性別決定與分化的良好實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀１狙芯繌幕蚪M水平和性腺轉(zhuǎn)錄組水平對羅非魚gsdf進(jìn)行分離鑒定,并做進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析；通過RT-PCR、real-time PCR和免疫組化等方法分析gsdf/Gsdf在羅非魚中的表達(dá)模式；使用轉(zhuǎn)基因過表達(dá)和CR1SPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲除兩種方法,從正反兩方面對Gsdf進(jìn)行功能研究,以揭示Gsdf在羅非魚性別決定與分化中的作用...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 脊椎動物的性別決定
        1.1 哺乳類性別決定
        1.2 鳥類性別決定
        1.3 爬行類性別決定
        1.4 兩棲類性別決定
        1.5 魚類性別決定
    2 性別決定基因的研究進(jìn)展
        2.1 SRY/Sry
        2.2 Dmrt1
        2.3 Foxl2
        2.4 DMY
        2.5 DM-W
        2.6 amhY
        2.7 amhr Ⅱ
        2.8 sdY
        2.9 gsdyY

    3 硬骨魚類gsdf研究現(xiàn)狀
    4 科學(xué)問題的提出和本研究的目的意義
第二章 羅非魚gsdf/Gsdf分離及表達(dá)的初步研究
    1 前言
    2 材料、儀器與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.3 有關(guān)試劑的配制
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 羅非魚gsdf基因的分離
            2.4.2 gsdf基因結(jié)構(gòu)分析
            2.4.3 gsdf氨基酸序列比對
            2.4.4 gsdf系統(tǒng)進(jìn)化分析
            2.4.5 gsdf共線性分析
            2.4.6 總RNA提取
            2.4.7 第一鏈cDNA的合成
            2.4.8 羅非魚gsdf組織表達(dá)模式分析
            2.4.9 羅非魚性腺個體發(fā)育過程中g(shù)sdf的表達(dá)
            2.4.10 免疫組化檢測羅非魚性腺組織中Gsdf表達(dá)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 gsdf基因結(jié)構(gòu)分析
        3.2 gsdf氨基酸同源性比對
        3.3 gsdf系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.4 gsdf共線性分析
        3.5 gsdf組織表達(dá)模式分析
        3.6 gsdf在不同時期性腺中的表達(dá)
        3.7 Gsdf在羅非魚性腺發(fā)育過程中的細(xì)胞定位
    4 討論
第三章 羅非魚Gsdf功能的初步研究
    1 前言
    2 材料、儀器與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.3 有關(guān)試劑的配制
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 羅非魚gsdf CRISPR/Cas9敲除
            2.4.2 羅非魚性腺過表達(dá)gsdf
            2.4.3 gsdf突變F1代的建立
    3 結(jié)果與分析
        3.1 敲除序列的選擇以及突變檢測
        3.2 陽性敲除魚的篩選和敲除效率統(tǒng)計(jì)
        3.3 Gsdf缺失產(chǎn)生不完全性逆轉(zhuǎn)
        3.4 3月齡XY個體Gsdf缺失陽性魚性腺免疫組化檢測結(jié)果
        3.5 6月齡XY個體Gsdf敲除陽性魚性腺免疫組化檢測結(jié)果
        3.6 Gsdf缺失陽性魚血清雌激素水平上調(diào)雄激素水平下調(diào)
        3.7 轉(zhuǎn)基因過表達(dá)Gsdf的篩選和效率統(tǒng)計(jì)
        3.8 轉(zhuǎn)基因過表達(dá)Gsdf陽性個體發(fā)生性逆轉(zhuǎn)
        3.9 gsdf突變F1代魚檢測
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間所發(fā)表的論文
在讀期間參加科研情況



本文編號：3984191

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