錦鯉皰疹病毒病是由鯉皰疹病毒3型（Cyprinid herpesvirus3，CyHV-3）感染各日齡錦鯉、鯉魚包括鯉魚的普通變種（比如框鏡鯉）,引起錦鯉、鯉魚爛鰓病和高死亡率的新病毒病，已引起世界各國的高度關(guān)注。錦鯉皰疹病毒病造成的魚類死亡率高達(dá)80-100%，具有高度的傳染性，是一類烈性傳染病，一旦爆發(fā)疫情難以控制。1998年此病在以色列首次發(fā)現(xiàn)，隨后在全世界十幾個國家和地區(qū)傳播與流行，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鯉魚養(yǎng)殖是我國的傳統(tǒng)養(yǎng)殖項目，數(shù)量多，分布廣。錦鯉皰疹病毒病在國內(nèi)發(fā)病頻繁，加之運輸和商業(yè)繁榮，若疫病一處暴發(fā)，很快危及整個地區(qū)乃至全國的鯉魚養(yǎng)殖行業(yè)，甚至其他淡水魚類的養(yǎng)殖，造成整個鯉魚養(yǎng)殖鏈的癱瘓，給我國的進(jìn)出口貿(mào)易和國民經(jīng)濟(jì)帶來的損失不可估量。2007年，國家質(zhì)檢總局發(fā)布預(yù)報，加強(qiáng)對進(jìn)口錦鯉和鯉魚的監(jiān)測力度，要求在進(jìn)出口貿(mào)易活動中把錦鯉皰疹病毒病作為必檢項目。 目前的研究成果顯示，免疫疫苗是防治錦鯉皰疹病毒病的有效方法，但是我國目前還沒有研制出確實、有效的疫苗，在錦鯉皰疹病毒病疫苗研制方面還處于摸索階段。文獻(xiàn)報道，該病的診斷方法有多種。臨床應(yīng)用比較普遍的是通過臨床癥狀以及剖...

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要 Abstract 第一章 前言
1 錦鯉皰疹病毒病研究進(jìn)展
    1.1 鯉皰疹病毒 3 型病原學(xué)
    1.2 錦鯉皰疹病毒病流行病學(xué)
    1.3 臨床癥狀
    1.4 病理變化
    1.5 診斷方法
    1.6 預(yù)防與控制
2 鯉皰疹病毒 3 型分子生物學(xué)研究進(jìn)展
    2.1 基因組特點
    2.2 開放閱讀框
    2.3 毒株的進(jìn)化
    2.4 鯉皰疹病毒 3 型與皰疹病毒的關(guān)系
3 原核表達(dá)系統(tǒng)
    3.1 簡介
    3.2 原核表達(dá)系統(tǒng)在水產(chǎn)方面的應(yīng)用
4 研究目的和意義 第二章 SYBR GREEN I CYHV-3 實時熒光定量 PCR 檢測方法的建立
1 材料
    1.1 病毒和細(xì)胞
    1.2 主要試劑及耗材
    1.3 主要儀器
2 方法
    2.1 CyHV-3 的培養(yǎng)
    2.2 CyHV-3DNA 的提取
    2.3 PCR 陽性標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的制備
    2.4 標(biāo)準(zhǔn)品濃度的計算
    2.5 重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性檢驗
    2.6 SYBR Green I 實時熒光定量 PCR 檢測方法的建立
3 結(jié)果
    3.1 PCR 擴(kuò)增目的基因
    3.2 重組克隆載體的鑒定
    3.4 重組質(zhì)粒濃度的測定
    3.5 重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性試驗
    3.6 熒光定量 PCR 循環(huán)條件和退火溫度的優(yōu)化
    3.7 最佳引物濃度確定和融解曲線分析
    3.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線的生成
    3.9 熒光定量 PCR 反應(yīng)體系
4 討論
    4.1 實時熒光定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
    4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和回歸方程的設(shè)定
    4.3 實時熒光定量 PCR 引物設(shè)計
    4.4 關(guān)于熒光域值的設(shè)定
    4.5 關(guān)于實時熒光定量 PCR 假陽性和假陰性的問題
5 小結(jié) 第三章 錦鯉皰疹病毒病流行病學(xué)調(diào)查
1. 材料
2. 方法
    2.1 樣品采集及處理
    2.2 樣品基因組的提取
    2.3 熒光定量 PCR 檢測
    2.4 普通 PCR 對樣品的檢測
    2.5 國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對部分樣品的檢測
3 結(jié)果
    3.1 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果
    3.2 國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對部分樣品的 PCR 檢測結(jié)果
4 討論
5 小結(jié) 第四章 DNA 疫苗在鯉魚體內(nèi)組織代謝與分布
1 材料
    1.1 實驗動物
    1.2 病毒、細(xì)胞和質(zhì)粒
    1.3 主要試劑
    1.4 主要儀器
2 方法
    2.1 重組質(zhì)粒的大量提取及純化
    2.2 重組質(zhì)粒免疫鯉魚
    2.3 熒光定量 PCR 檢測核酸疫苗的組織分布
3 結(jié)果
    3.1 pIRES-ORF81 質(zhì)粒的組織分布
4 討論
    4.1 DNA 疫苗在魚類免疫中的應(yīng)用
    4.2 DNA 疫苗的免疫方法
    4.3 DNA 疫苗在機(jī)體的分布與代謝
5 小結(jié) 第五章 CYHV-3 ORF108 的原核表達(dá)及免疫原性研究
1 材料
    1.1 病毒和細(xì)胞
    1.2 主要試劑及耗材
    1.3 主要儀器
2 方法
    2.1 引物設(shè)計
    2.2 病毒基因組提取
    2.3 ORF108 基因的擴(kuò)增
    2.4 PCR 產(chǎn)物的克隆及鑒定
    2.5 重組表達(dá)質(zhì)粒 pET32a-108 的構(gòu)建
    2.6 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.7 表達(dá)產(chǎn)物的 SDS-PAGE 分析
    2.8 表達(dá)蛋白的回收與純化
    2.9 表達(dá)蛋白的多克隆抗體的制備及抗體反應(yīng)原性鑒定
3 結(jié)果
    3.1 ORF108 基因的 PCR 擴(kuò)增
    3.2 ORF108 基因克隆質(zhì)粒的鑒定
    3.3 重組表達(dá)質(zhì)粒 pET32a-ORF108 的鑒定
    3.4 表達(dá)產(chǎn)物的 SDS-PAGE 分析
    3.5 表達(dá)蛋白的抗體的制備及抗體反應(yīng)原性鑒定
4 討論
    4.1 關(guān)于 ORF108 蛋白
    4.2 關(guān)于原核表達(dá)載體
    4.3 關(guān)于免疫學(xué)檢測方法
5 小結(jié) 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 作者簡介 致謝



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