甲殼動物是重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖動物,甲殼動物的養(yǎng)殖與捕撈量占世界水產(chǎn)品總量的百分之十。然而,近年來水產(chǎn)病害頻發(fā)使水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)蒙受了巨大的損失。為了防控甲殼類水產(chǎn)養(yǎng)殖中病害的發(fā)生,對它們先天免疫機(jī)理的深入研究是很有必要的。雖然經(jīng)過近20年的不懈努力,甲殼動物先天免疫的研究取得了顯著的成果,但距離真正解決水產(chǎn)病害這一難題還有一定的距離,很多先天免疫的分子機(jī)制還有待揭示。 本論文中,作者從克氏原螯蝦中鑒定出一種抑制素,發(fā)現(xiàn)其能夠抑制病毒復(fù)制。還初步探討了對蝦JAK/STAT信號通路的組成以及在對蝦細(xì)菌免疫中的功能與調(diào)控。 1.克氏原螯蝦抑制素參與抗病毒免疫的研究 抑制素(Prohibitins,PHBs)是一類在真核生物中廣泛表達(dá)的,具有很高保守性的蛋白質(zhì)。它與細(xì)胞凋亡、癌癥、細(xì)胞死亡、應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞增殖以及免疫調(diào)控等眾多生命反應(yīng)有關(guān)。但是,PHB在甲殼動物免疫中的功能報道還很少。本研究中從克氏原螯蝦中鑒定出一種抑制素,生物信息學(xué)分析確定其為抑制素1,命名為PcPHB1。PcPHB1在小龍蝦各組織中廣泛表達(dá),在白班綜合征病毒(WSSV)刺激后其在核酸水平和蛋白水平的表達(dá)量都有明顯的提高。研究發(fā)現(xiàn),在...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一章 綜述
    免疫系統(tǒng)
    先天免疫
    1. 抑制素研究進(jìn)展
    2. JAK/STAT信號通路的研究進(jìn)展
    3. 抗菌肽的研究進(jìn)展
    4. 本研究的目的
第二章 克氏原螯蝦抑制素抑制白斑病毒復(fù)制
    一. 引言
    二. 材料與方法
        1. 菌株,載體,試劑,儀器
        2. 白斑病毒感染小龍蝦及組織材料的收集
        3. 基因克隆及其序列分析
        4. 組織分布及其表達(dá)模式分析
        5. 重組表達(dá)和多克隆抗體的制備
        6. 蛋白水平的組織分布和表達(dá)模式分析
        7. PHB1重組蛋白抑制白斑病毒復(fù)制的體內(nèi)實驗
        8. RNA干擾實驗
        9. 使用Far-Western技術(shù)檢測PHB1與病毒蛋白的相互作用
        10. Pull-down,CoIP實驗
        11. 免疫細(xì)胞化學(xué)實驗
        12. 三維模型分析
        13. 免疫膠體金實驗
    三. 結(jié)果
        1. PHB1序列分析與鑒定
        2. PHB1的組織分布
        3. PHB1在病毒刺激后的表達(dá)模式
        4. 病毒復(fù)制抑制試驗
        5. PHB1干擾和干擾后蛋白拯救時病毒復(fù)制檢測
        6. 小龍蝦存活率統(tǒng)計
        7. PHB1與WSSV的囊膜蛋白VP24、VP26以及VP28相互作用
        8. PHB1與VP28的相互作用的3D模型
        9. PHB1黏附在WSSV的表面
    四. 討論
第三章 JAK/STAT信號通路參與對蝦的抗細(xì)菌免疫
    一. 引言
    二. 材料與方法
        1. 菌株,載體,試劑,儀器
        2. 實驗動物與免疫刺激
        3. 基因克隆,表達(dá)純化與抗體制備
        4. 基因軟件分析與鑒定
        5. 實時定量PCR檢測組織分布與表達(dá)模式
        6. 細(xì)菌結(jié)合實驗
        7. 多糖結(jié)合實驗
        8. Pull-down實驗
        9. RNAi實驗
        10. 細(xì)菌清除實驗
        11. 死亡率統(tǒng)計
        12. Western blot實驗
        13. 免疫細(xì)胞化學(xué)實驗檢測MjSTAT的細(xì)胞定位
        14. AMPs篩選
        15. MjSOCS2和INH5抑制STAT磷酸化
    三. 結(jié)果
        1. 基因克隆與表達(dá)
        2. MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2的組織分布
        3 弧菌刺激后MjIL-CTL、MjDome、MjSTAT和MjSOCS2在腸中的表達(dá)模式
        4. MjIL-CTL能夠與細(xì)菌相互作用
        5. MjIL-CTL與MjDome的結(jié)合實驗
        6. 弧菌表面分子能夠誘導(dǎo)STAT的磷酸化
        7. STAT被磷酸化前后亞細(xì)胞定位的檢測
        8. MjDome參與STAT信號途徑
        9. JAK/STAT通路調(diào)控抗菌肽的表達(dá)
        10. MjSTAT和MjSOCS2在抗弧菌免疫中的作用
    四. 討論
第四章 一種含跨膜域的甲殼肽參與細(xì)胞吞噬作用
    一. 引言
    二. 材料與方法
        1. 菌株,載體,試劑,儀器
        2. 實驗動物與免疫刺激
        3. 基因克隆與鑒定
        4. 重組表達(dá)和抗體的制備
        5. MjMCru亞細(xì)胞定位
        6. 實時定量PCR和Western blot分析MjMCru表達(dá)模式
        7. 液體抑菌實驗
        8. 細(xì)菌結(jié)合實驗
        9. 多糖結(jié)合實驗
        10. 死亡率統(tǒng)計
        11. 細(xì)胞吞噬實驗
    三. 結(jié)果
        1. 基因的克隆與鑒定
        2. MjMCru的組織分布
        3. MjMCru的亞細(xì)胞定位研究
        4. MjMCru被弧菌和金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)
        5. WAP結(jié)構(gòu)域抑制細(xì)菌的增殖
        6. MjMCru能夠通過結(jié)合細(xì)菌的PAMPs結(jié)合細(xì)菌
        7. MjMCru多肽能夠提高細(xì)菌刺激時對蝦的存活率
        8. MjMCru參與了細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬過程
    四. 討論
總結(jié)和創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3960390