溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)屬革蘭氏陰性菌,是重要的條件致病菌,能夠引起魚類的弧菌病,對海洋魚類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成經(jīng)濟損失。全面了解溶藻弧菌的致病機制將有助于開發(fā)高效疫苗。目前鑒定的與溶藻弧菌致病性相關的毒力因子有群體感應系統(tǒng)、分泌系統(tǒng)、鐵載體攝取系統(tǒng)、運動性和生物被膜等,其中群體感應系統(tǒng)全局調控毒力因子的表達。溶藻弧菌群體感應系統(tǒng)的中樞元件AphA和LuxR是全局性的轉錄調控因子,可調控多種目的基因的表達,而人們對aphA和luxR本身受到哪些轉錄調控因子的調控作用卻知之甚少。為了尋找溶藻弧菌中調控aphA和luxR的轉錄因子,我們構建了一個細菌單雜交系統(tǒng)。利用該系統(tǒng)分別篩選了aphA和luxR的轉錄調控因子,并對其中兩個因子的調控機制進行了較為深入的分析,為解析細菌群體感應系統(tǒng)介導細胞密度信號和其他生理信號調控基因表達并表現(xiàn)多細胞群體行為打下了良好基礎。本論文首先在商業(yè)化細菌雙雜交系統(tǒng)的基礎上改造得到一個新型的細菌單雜交系統(tǒng),并構建了含有285個基因的溶藻弧菌轉錄因子文庫。從文庫中,分別篩選到了 99個aphA的轉錄調控因子及76個luxR的轉錄調控因子,它們分布...

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１１?ＬＴＴＲ依賴性轉錄調控經(jīng)典模型示意圖１１１８１??．．－

????（ＬｙｓＲ）?ｌｙｓＲ??圖１．１１?ＬＴＴＲ依賴性轉錄調控經(jīng)典模型示意圖１１１８１??Ｆｉｇ．?１．１１?Ａ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｌａｓｓｉｃａｌ?ｍｏｄｅｌ?ｆｏｒ?ＬＴＴＲ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ....

圖１．１４細菌單雜交系統(tǒng)＿??

Ｋａｎ??［Ｒｅｐｏｒｔｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ?Ｊ?Ｚｉｎｃ?Ｆｉｎｇｅｒ?Ｐｌａｓｍｉｄｓ??圖１．１５鑒定鋅指－ＤＮＡ相互作用的單雜交系統(tǒng)［｜２７］??Ｆｉｇ．?１．１５?Ｏｎｅ－ｈｙｂｒｉｄ?ｓｙｓｔｅｍ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｚｉｎｃ?ｆｉｎｇｅｒ－ＤＮＡ?ｉ....

圖２．１溶藻弧菌群體感應系統(tǒng)??Ｆｉｇ．?２．１?Ｑｕｒｏｍ?ｓｅｎｓｉｎｇ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?Ｖｉｂｒｉｏ?ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ．??

溶藻弧菌的群體感應系統(tǒng)類似于哈維氏弧菌群體感應系統(tǒng)，有三套平行的信??號通路，含三種信號分子ＡＩ－１、ＡＩ－２和ＣＡＩ－１，分別由ＬｕｘＭ、ＬｕｘＰ及ＣｑｓＡ合??成（圖２．１）。當細菌濃度較低時，溶藻弧菌合成的三種信號分子濃度較低，分泌??到胞外含量較少，不能被ＬｕｘＮ、Ｌｕｘ....

圖３．２?？／？／ｉ忍影響仍／７的表達??Ｆｉｇ．?３．２?ＡｐｈＢ?ｒｅｇｕｌａｔｅｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ａｓｐ．?Ａ．?ＨＰＡ?ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?

將相同劑量的野生株ＥＰＧＳ、缺失株及印Ａ５＋回補株通過肌肉注射注入斑??馬魚體內，記錄４天內因溶藻弧菌感染而發(fā)生死亡的個數(shù)，比較三者之間的存活??率差異（圖３．１Ｂ）。該實驗中所用的斑馬魚體長均在３?ｃｍ左右，并經(jīng)過２周馴養(yǎng)，??體征穩(wěn)定。結果顯示，注射野生株后的斑馬魚的存活率僅....

本文編號：3960285