副溶血弧菌是一種短桿菌,革蘭氏染色呈陰性,具有嗜鹽性。其主要的棲息地在海水中,是近海岸常見的食源性病原菌。臨床上主要通過食用被副溶血弧菌污染的生的或未熟的海產(chǎn)品而感染,能夠引起人嘔吐、腹瀉、頭痛、傷口感染,甚至?xí)䦟?dǎo)致敗血癥。對動物主要引起水生動物疾病,例如對蝦、鮑魚、蟹類等,造成動物大量死亡。為研究副溶血弧菌二硫鍵氧化還原蛋白VpDsbA的氧化性和還原性,首先將編碼VpDsbA蛋白的目的基因VP3054(VpdsbA1)和VPA1271(VpdsbA2)克隆至原核表達(dá)載體pET-28a上,進(jìn)而轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)中,進(jìn)行蛋白原核表達(dá),并使用鎳柱親和層析的方法,純化出VpDsbA1和VpDsbA2蛋白。利用純化后的蛋白制備VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗體,為后續(xù)試驗的開展奠定基礎(chǔ)。為了進(jìn)一步研究VpDsbA的體外功能,采用胰島素作為底物測定還原酶活性的方法,確定VpDsbA具有還原酶活性,且VcDsbA>VpDsbA1>EcDsbA>VpDsbA2。利用谷胱甘肽(GSH/GSSG)處理蛋白并根據(jù)相應(yīng)的公式,從而計算出VpDsbA1的氧還電位大小...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1A.重組載體pSL1301的PCR（VpdsbA2-n載體pSL1301圖譜；C.重組載體pSL1302的PC鑒定；D.重組載

第二章VpDsbA蛋白表達(dá)2.3結(jié)果與分析2.3.1重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定將VpdsbA1和VpdsbA2的PCR產(chǎn)物和HindⅢ和NdeⅠ、HindⅢ進(jìn)行雙酶切之后DH5α中，得到重組載體pSL1302和pS基因的上游引物VpdsbA1-nosignal....

圖2.215%SDS-PAGE檢測蛋白VpDsbA1、VpDsbA2純化結(jié)果

副溶血弧菌DsbA蛋白功能的研究Figure2.1A.IdentificationofrecombinantplasmidpSL1301byPCR（VpdsbA2-nosignal-Fwd-NdeⅠ，T7-Terminal）;B.Themapofrec....

圖2.3VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗體制備結(jié)果特異性檢測Figure2.3PreparationresultverificationdetectionofVpDsbA1andVpDsbA2

圖2.3VpDsbA1和VpDsbA2多克隆抗體制備結(jié)果特異性檢測Figure2.3PreparationresultverificationdetectionofVpDsbA1andVpDsbA注：M為蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)4討論構(gòu)建的重組載體要成功表達(dá)....

圖3.1不同菌株DsbA蛋白二硫鍵還原酶活性對比

其中：E0`GSH/GSSG=-240mV，R=8.314JK-1mol，T=298K，n=2，F(xiàn)=9.648×104Cmol-13.3結(jié)果與分析3.3.1VpDsbA蛋白還原酶活性測定通過胰島素作為底物，將不同蛋白分別用PBS緩沖液稀釋，使用酶標(biāo)儀連續(xù)讀數(shù)的....

本文編號：3919431