牙鲆(Paralichthysolivaceus)是研究魚類變態(tài)發(fā)育的理想模型。甲狀腺激素(Thyroid Hormone,TH)在牙鲆變態(tài)發(fā)育過程中發(fā)揮著決定性作用。甲狀腺激素的生理作用主要是通過甲狀腺激素受體(Thyroid Hormone Receptors,TRs)發(fā)揮,TRs有TRα和TRβ兩種亞型。TR通過結合甲狀腺激素反應元件(TRE)的特異性DNA序列—AGGT(C/A)A來調節(jié)靶基因的轉錄。為找出TH直接調控的靶基因,本研究以甲狀腺激素受體TRαA、TRβ為對象,在HEK293T細胞中表達并純化了牙鲆p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白,采用一種目的基因循環(huán)擴增與篩選(CAST,Cyclic Amplification and Selection of Target)的方法,得到一些與融合蛋白結合的特異性序列,對比牙鲆基因組后并用雙熒光素酶報告實驗和熒光定量PCR實驗鑒定出TH調控的靶基因。主要結果如下:1.牙鲆TRαA、TRβ真核表達載體構建及融合蛋白表達純化取實驗室已有的p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重組真核表達載體,TA克隆...

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【學位級別】：碩士

圖2-1p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ重組質粒目的片段驗證

圖2-2p3×Flag-TRαA和p3×Flag-TRβ融合蛋白表達驗證

圖2-3隨機文庫驗證

圖2-4識別序列驗證

本文編號：3882861