隨著對蝦養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大、養(yǎng)殖環(huán)境的惡化，對蝦病毒病大范圍暴發(fā)，探索對蝦病毒的感染機(jī)制、致病機(jī)理、傳播途徑等是防止其進(jìn)一步曼延的基礎(chǔ)，盡管國內(nèi)外許多專家學(xué)者在對蝦病毒性疾病防控技術(shù)上做出了不懈的努力，取得了一定的研究成果，但對蝦疾病并未取得理想的防治效果。目前，隨著細(xì)胞分子生物學(xué)、基因工程、計(jì)算機(jī)技術(shù)等學(xué)科的發(fā)展，出現(xiàn)了高效、快速的藥物篩選模型，在新藥的篩選和研發(fā)中發(fā)揮了積極的作用。結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)篩選有抗對蝦白斑綜合征病毒作用的中草藥，防止對蝦病毒性疾病的大肆傳播，將為對蝦養(yǎng)殖業(yè)的快速穩(wěn)定發(fā)展提供有力的技術(shù)支持。 1.刀額新對蝦原代淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及其感染白斑綜合征病毒（WSSV）的病理特征 配制改良的1.5×L-15培養(yǎng)基對刀額新對蝦（Metapenaeus ensis，又名基圍蝦）淋巴組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，初步建立藥物篩選的細(xì)胞平臺。同時，使用蔗糖密度離心法提取WSSV病毒粒子，以純化的病毒感染淋巴細(xì)胞，倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、透射電子顯微鏡下觀察接種病毒后細(xì)胞的病理變化，為藥物篩選提供判斷依據(jù)。結(jié)果表明，使用添加SME、FBS、EGF、bFGF、青霉素鈉和硫酸鏈霉素的1.5×L-15培養(yǎng)...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）
        1.1. WSSV 的大小及形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2. WSSV 的致病機(jī)理
        1.3. 機(jī)體感染 WSSV 后的癥狀及病理變化
        1.4. WSSV 的防治措施
    2. 對蝦細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1. 對蝦細(xì)胞培養(yǎng)的研究歷程
        2.2. 培養(yǎng)基的選擇
        2.3. 對蝦細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
    3. 抗病毒中草藥
        3.1. 抗病毒中草藥的作用機(jī)理
        3.2. 抗病毒中草藥的活性成分
        3.3. 抗病毒中草藥的應(yīng)用
    4. 藥物篩選技術(shù)的研究
        4.1. 整體動物篩選模型
        4.2. 組織器官水平篩選模型
        4.3. 細(xì)胞水平篩選模型
        4.4. 高通量藥物篩選模型
        4.5. 高內(nèi)涵藥物篩選模型
    5. 立題依據(jù)、研究內(nèi)容和意義
第二章 刀額新對蝦原代淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及其感染白斑綜合征病毒（WSSV）的病理特征
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1. 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1. 實(shí)驗(yàn)動物
            2.1.2. 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.3. 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1. 蝦肌提取液（SME）的制備
            2.2.2. 培養(yǎng)基的配制
            2.2.3. 對蝦淋巴組織原代培養(yǎng)
            2.2.4. 病毒粗提液的制備
            2.2.5. 對蝦 WSSV 陽性檢測
            2.2.6. WSSV 的純化
            2.2.7. WSSV 感染原代細(xì)胞
            2.2.8. 病變細(xì)胞固定
            2.2.9. 細(xì)胞熒光染色
    3. 結(jié)果
        3.1. 對蝦 WSSV 的陽性檢測
        3.2. 對蝦細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        3.3. 病毒粒子的負(fù)染
        3.4. 感染 WSSV 后的淋巴細(xì)胞
        3.5. 感染病毒后淋巴細(xì)胞的電鏡切片
        3.6. 感染病毒后淋巴細(xì)胞的熒光染色觀察
    4. 討論
    5. 本章小結(jié)
第三章 抗對蝦白斑綜合征病毒中草藥的初步篩選
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1. 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1. 原代細(xì)胞
            2.1.2. 中草藥
            2.1.3. 實(shí)驗(yàn)儀器
            2.1.4. 實(shí)驗(yàn)藥品
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1. 中草藥的煎制
            2.2.2. 中草藥與 WSSV 的混合液感染細(xì)胞
            2.2.3. 細(xì)胞基因組 DNA 的提取
            2.2.4. 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.2.5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
            2.2.6. 實(shí)時熒光定量 PCR 檢測
            2.2.7. 熒光染料染凋亡細(xì)胞
    3. 結(jié)果
        3.1. 標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建
        3.2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.3. 實(shí)時熒光定量 PCR 檢測細(xì)胞中病毒拷貝數(shù)
        3.4. 細(xì)胞的熒光染色觀察
    4. 討論
    5. 本章小結(jié)
第四章 抗對蝦白斑綜合征病毒復(fù)方中草藥的篩選及臨床驗(yàn)證
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1. 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1. 原代細(xì)胞
            2.1.2. 中草藥
            2.1.3. 實(shí)驗(yàn)動物
        2.2. 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1. 中草藥安全濃度的確定
            2.2.2. 復(fù)方中草藥與 WSSV 的混合液感染細(xì)胞
            2.2.3. 實(shí)驗(yàn)用藥餌的制作
            2.2.4. 復(fù)方中草藥的臨床驗(yàn)證
            2.2.5. 樣品的固定與保存
    3. 結(jié)果
        3.1. 中草藥安全濃度的確定
        3.2. 抗 WSSV 復(fù)方中草藥的臨床應(yīng)用效果
        3.3. 組織的超微病理觀察
    4. 討論
    5. 本章小結(jié)
問題與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間學(xué)術(shù)成果



本文編號：3806933