糖酵解途徑中的酶具有代謝功能之外的眾多生物學(xué)活性。不少研究報(bào)道顯示,病原菌的三磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphata dehydrogenase,GAPDH)具有毒力相關(guān)作用和疫苗應(yīng)用的潛力。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作也發(fā)現(xiàn)魚(yú)類重要病原菌遲緩愛(ài)德華氏菌的二磷酸果糖醛縮酶(Fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)具有免疫保護(hù)作用。本研究進(jìn)一步探索了遲緩愛(ài)德華氏菌糖酵解途徑中另外8個(gè)酶包括:己糖激酶(Hexokinase,HK)、磷酸葡萄糖異構(gòu)酶(Phosphoglucose isomerase,PGI)、磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase,PFK)、磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triose phosphate isomerase,TPI)、磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,PGK)、磷酸甘油酸變位酶(Phosphoglycerate mutase,PGM)、烯醇化酶(Enolase,ENO)、丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PK)是否也具有免疫保護(hù)效果。首先從本實(shí)驗(yàn)室所分離的強(qiáng)...

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 遲緩愛(ài)德華氏菌及其危害
    1.2 反向疫苗學(xué)及其研究進(jìn)展
        1.2.1 反向疫苗學(xué)
        1.2.2 反向疫苗學(xué)在遲緩愛(ài)德華氏菌上的應(yīng)用
    1.3 糖酵解途徑中部分酶的多功能性
        1.3.1 己糖激酶(Hexokinase,HK)
        1.3.2 磷酸葡萄糖異構(gòu)酶(Phosphoglucose isomerase,PGI)
        1.3.3 磷酸果糖激酶Phosphofructokinase,PFK)
        1.3.4 磷酸丙糖異構(gòu)酶(Triose phosphate isomerase,TPI)
        1.3.5 磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,PGK)
        1.3.6 磷酸甘油酸變位酶(Phosphoglycerate mutase,PGM)
        1.3.7 烯醇化酶(Enolase,ENO)
        1.3.8 丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)
    1.4 魚(yú)類免疫系統(tǒng)
        1.4.1 魚(yú)類免疫器官
        1.4.2 魚(yú)類免疫細(xì)胞及免疫因子
    1.5 本課題研究背景及意義
第2章 糖酵解途徑中部分酶的基因克隆、蛋白表達(dá)及純化
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌株與質(zhì)粒
        2.2.2 引物
        2.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 候選抗原蛋白重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 重組候選抗原蛋白的表達(dá)與純化
        2.3.3 內(nèi)毒素的檢測(cè)與去除
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 各候選抗原蛋白在不同菌中序列比對(duì)分析
        2.4.2 各候選抗原蛋白重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4.3 蛋白的表達(dá)與純化
        2.4.4 細(xì)菌內(nèi)毒素的去除
    2.5 小結(jié)
第3章 候選抗原蛋白在斑馬魚(yú)上的免疫保護(hù)力分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 斑馬魚(yú)馴養(yǎng)
        3.3.2 斑馬魚(yú)免疫與攻毒
        3.3.3 候選重組抗原蛋白相對(duì)免疫保護(hù)率的測(cè)定
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 斑馬魚(yú)預(yù)攻毒
        3.4.2 斑馬魚(yú)攻毒
    3.5 本章小結(jié)
第4章 候選抗原蛋白在大菱鲆上的免疫保護(hù)效果
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 菌株、細(xì)菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 大菱鲆免疫
        4.3.2 免疫后大菱鲆血清抗體效價(jià)測(cè)定
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 免疫后大菱鲆血清抗體效價(jià)分析
        4.4.2 大菱鲆血清中抗體與其它海洋病原菌的交叉反應(yīng)
    4.5 本章小結(jié)
第5章 候選抗原蛋白免疫斑馬魚(yú)后免疫相關(guān)因子的表達(dá)差異分析
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 斑馬魚(yú)脾臟及腎臟RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄
        5.3.2 RT-qPCR
    5.4 結(jié)果與討論
    5.5 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
附件



本文編號(hào)：3799794