神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿通過膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)抑制炎癥因子的釋放,參與調(diào)控機(jī)體的免疫反應(yīng)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),馬氏珠母貝血細(xì)胞中煙堿型乙酰膽堿受體在插核后有顯著性上調(diào),說明膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)參與調(diào)控珍珠貝插核后的免疫反應(yīng)。為了闡明其作用機(jī)制,本研究通過分析馬氏珠母貝基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選出膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的關(guān)鍵基因,并進(jìn)行基因克隆、表達(dá)、細(xì)胞定位和表達(dá)調(diào)控機(jī)制分析。主要研究結(jié)果如下:(1)乙酰膽堿受體基因的克隆和定量分析:克隆獲得馬氏珠母貝6個(gè)煙堿型乙酰膽堿受體基因(PmnAChRα1、PmnAChRα2、PmnAChRα3、PmnAChRα4、PmnAChRα5和PmnAChRα6)的cDNA全長序列,分別編碼465、446、445、420、456和438個(gè)氨基酸。6個(gè)基因均具有4個(gè)典型的跨膜結(jié)構(gòu)域(TM)、半胱氨酸環(huán)(Cys^loop)以及保守的胞外段配體結(jié)合區(qū)域(LBD)。Real-time PCR技術(shù)分析顯示6個(gè)基因在珍珠貝的各個(gè)組織中均有分布,鰓中表達(dá)量最高;原位雜交表明,6個(gè)基因均在不同血細(xì)胞中呈現(xiàn)特異性表達(dá),根據(jù)血細(xì)胞的分類標(biāo)準(zhǔn),我們推測PmnAChRα1...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 珍珠貝的免疫機(jī)制概述
    1.2 膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的作用機(jī)制
        1.2.1 膽堿能系統(tǒng)的分子組成
        1.2.2 膽堿能系統(tǒng)的抑炎作用
    1.3 膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    1.4 膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)與microRNA的關(guān)系
    1.5 研究目的和意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用貝及菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑及耗材
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需溶液及培養(yǎng)基的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 乙酰膽堿受體基因的篩選及預(yù)測
        2.2.2 乙酰膽堿受體基因的克隆
        2.2.3 生物信息學(xué)分析
        2.2.4 乙酰膽堿受體基因的表達(dá)分析
        2.2.5 膽堿能免疫調(diào)節(jié)機(jī)制（NF-kB信號通路）
        2.2.6 膽堿能系統(tǒng)的損傷修復(fù)作用
        2.2.7 乙酰膽堿受體基因在血細(xì)胞中的定位
        2.2.8 免疫microRNA對乙酰膽堿受體基因的調(diào)控分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 乙酰膽堿受體基因的克隆及序列分析
        3.1.1 PmnAChRα1 基因的克隆及序列分析
        3.1.2 PmnAChRα2 基因的克隆及序列分析
        3.1.3 PmnAChRα3 基因的克隆及序列分析
        3.1.4 PmnAChRα4 基因的克隆及序列分析
        3.1.5 PmnAChRα5 基因的克隆及序列分析
        3.1.6 PmnAChRα6 基因的克隆及序列分析
        3.1.7 馬氏珠母貝乙酰膽堿受體基因的相似性和聚類分析
    3.2 乙酰膽堿受體基因的表達(dá)分析
        3.2.1 乙酰膽堿受體基因的組織定量分析
        3.2.2 乙酰膽堿受體基因在血細(xì)胞中的定位
        3.2.3 植核后 30d內(nèi)乙酰膽堿受體基因在血淋巴中的時(shí)序表達(dá)
        3.2.4 LPS刺激后乙酰膽堿受體基因在血淋巴中的時(shí)序表達(dá)
        3.2.5 膽堿能免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的抑炎作用機(jī)制（NF-kB信號通路）
        3.2.6 膽堿能系統(tǒng)的損傷修復(fù)作用
    3.3 乙酰膽堿受體基因的調(diào)控機(jī)制分析
        3.3.1 對乙酰膽堿受體基因具有調(diào)控作用的miRNA的篩選結(jié)果
        3.3.2 載體構(gòu)建結(jié)果
        3.3.3 靶向關(guān)系驗(yàn)證
4 討論
    4.1 乙酰膽堿受體基因的基本分子特征
    4.2 乙酰膽堿受體基因的表達(dá)分析
    4.3 膽堿能系統(tǒng)的免疫調(diào)節(jié)分析
    4.4 免疫miRNA對乙酰膽堿受體基因的調(diào)控分析
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介



本文編號：3798386