文蛤（Meretrix.meretrix）是我國沿海水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟貝類，其豐富多彩的殼色花紋可以遺傳給后代，并且與生長、抗逆等經(jīng)濟性狀密切相關(guān)，一些色澤鮮艷的文蛤商業(yè)價值顯著提高。許多水生動物體色、殼色多態(tài)性的產(chǎn)生是由于體內(nèi)控制色素合成的基因發(fā)生變異，而且紅、黃體色的形成與自身類胡蘿卜素的含量密切相關(guān)，培育殼色艷麗的文蛤新品系對文蛤養(yǎng)殖業(yè)具有重要的意義。在表觀遺傳學(xué)研究中，DNA胞嘧啶甲基化現(xiàn)象影響著生物體表型的改變，是真核生物基因組DNA修飾加工的方式之一。本研究以4個文蛤品系（紅殼、黑斑、白殼和細紋）為試驗材料，顯微觀察其外套膜色素帶并采用分光光度計法對紅殼和白殼文蛤外套膜中的類胡蘿卜素含量進行測定；從文蛤轉(zhuǎn)錄組文庫中篩選出類胡蘿卜素積累過程的兩個關(guān)鍵酶——GGPP合成酶（Geranylgeranyl pyrophosphatesynthase，GGPS）、β-胡蘿卜素加氧酶（beta,beta-carotene9’,10’-oxygenase-like，crtO）的EST序列，利用RACE技術(shù)獲得了GGPS和crtO基因的cDNA全長，并利用qRT-PCR技術(shù)對GGPS和cr... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1 類胡蘿卜素的種類和功能
        1.1 海產(chǎn)貝類體內(nèi)的類胡蘿卜素種類
        1.2 類胡蘿卜素的存在形式和部位
        1.3 海洋動物中類胡蘿卜素的功能
        1.4 海洋貝類殼色多態(tài)性與類胡蘿卜素的相關(guān)性
            1.4.1 影響殼色多態(tài)性的因素
            1.4.2 殼色多態(tài)性的分子機制
    2 類胡蘿卜素合成過程中關(guān)鍵酶及相關(guān)基因的研究進展
        2.1 牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合成酶
        2.2 八氫番茄紅素合成酶
        2.3 番茄紅素合成
        2.4 胡蘿卜素合成
    3 海洋經(jīng)濟貝類遺傳育種方法研究進展
第二章 文蛤外套膜色素帶的顯微觀察及其胡蘿卜素含量的測定
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 主要試劑
        1.2 方法
            1.2.1 取樣
            1.2.2 文蛤外套膜色素顆粒觀察
            1.2.3 類胡蘿卜素的分離及含量測定
        1.3 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果分析
        2.1 文蛤外套膜色素顆粒觀察
        2.2 不同殼色文蛤外套膜邊緣類胡蘿卜素含量的比較
    3 討論
        3.1 外套膜色素帶與文蛤殼色形成之間的關(guān)系
        3.2 類胡蘿卜素含量與文蛤殼色之間的關(guān)系
第三章 類胡蘿卜素累積過程關(guān)鍵基因的克隆及其與文蛤殼色的相關(guān)性研究
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 試劑
            1.1.2 菌株和質(zhì)粒
            1.1.3 引物合成及測序
            1.1.4 儀器設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 紅殼文蛤外套膜總 RNA 提取
            1.2.2 文蛤 GGPP 合成酶基因的克隆
                1.2.2.1 cDNA 第一條鏈的合成
                1.2.2.2 cDNA 末端快速擴增
                1.2.2.3 目的條帶割膠回收
                1.2.2.4 連接
                1.2.2.5 轉(zhuǎn)化
                1.2.2.6 菌液 PCR
                1.2.2.7 測序
            1.2.3 GGPP 在不同殼色文蛤外套膜中的表達差異分析
                1.2.3.1 文蛤外套膜 RNA 提取(Trizol 法)
                1.2.3.2 cDNA 第一鏈合成
                1.2.3.3 GGPP 基因和 crtO 基因熒光定量引物的設(shè)計
                1.2.3.4 qRT-PCR
                1.2.3.5 熒光定量數(shù)據(jù)處理
                1.2.3.6 基因序列的生物信息學(xué)分析
    2 結(jié)果分析
        2.1 文蛤外套膜 RNA 的提取及純度檢測
        2.2 文蛤 GGPP 基因和 crtO 基因全長的序列特征
        2.3 文蛤 GGPP 基因和 crtO 基因氨基酸序列特征
        2.4 文蛤 GGPP 和 crtO 基因的表達差異分析
    3
        3.1 文蛤 GGPS 和 crtO 氨基酸序列及結(jié)構(gòu)分析
        3.2 文蛤 GGPS 和 crtO 基因的表達分析
第四章 MSAP 標記技術(shù)在四種殼色文蛤中的差異分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 主要試劑
            1.1.2 主要試劑的配置
        1.2 方法
            1.2.1 DNA 的提取及純度檢測
            1.2.2 四種殼色文蛤的 MSAP 分析
                1.2.2.1 DNA 酶切及連接
                1.2.2.2 預(yù)擴增
                1.2.2.3 選擇性擴增
                1.2.2.4 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
        1.3 MSAP 引物篩選
        1.4 四種殼色文蛤群體甲基化差異分析
        1.5 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果分析
        2.1 基因組 DNA 的純度檢測結(jié)果
        2.2 酶切產(chǎn)物檢測結(jié)果
        2.3 預(yù)擴產(chǎn)物檢測結(jié)果
        2.4 選擇性擴增檢測結(jié)果
        2.5 MSAP 引物篩選
        2.6 殼色特異性引物篩選
        2.7 不同殼色文蛤的甲基化狀態(tài)分析
        2.8 不同殼色文蛤甲基化差異位點的篩選
    3 討論
第五章 小結(jié)
參考文獻
在學(xué)研究成果
致謝



本文編號：3716474