T細(xì)胞在魚類細(xì)胞免疫及抗感染過程中起著重要作用，CD3分子是僅存在于T淋巴細(xì)胞的一種膜表面抗原，與T細(xì)胞抗原受體（TCR）相連，參與T淋巴細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，可用于標(biāo)記T淋巴細(xì)胞、胸腺細(xì)胞等。根據(jù)抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，通過制備CD3分子抗體，則可用其對(duì)魚體組織中T淋巴細(xì)胞進(jìn)行研究。論文根據(jù)已公布的牙鲆CD3ε基因序列重組表達(dá)了牙鲆CD3，并制備了可特異性識(shí)別T細(xì)胞的抗CD3多克隆抗體（多抗），利用該多抗研究了牙鲆T細(xì)胞的組織分布及注射滅活愛德華氏菌后的數(shù)量變化。本文為深入研究T細(xì)胞在魚類免疫系統(tǒng)中的作用，理解魚類細(xì)胞免疫應(yīng)答機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下：本文根據(jù)牙鲆CD3ε基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，通過PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物純化獲得了CD3ε基因；將CD3基因片段與表達(dá)載體pET-30a質(zhì)粒連接，并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21（DE3）中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳分析表明，表達(dá)蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量約為27kDa（包含7kDa的標(biāo)簽蛋白），質(zhì)譜鑒定確認(rèn)為牙鲆CD3蛋白。親和層析法純化重組表達(dá)蛋白，用其免疫Balb/c小鼠制備鼠抗CD3多克隆抗體。利用該多抗與牙鲆白細(xì)胞進(jìn)行免疫共沉淀，發(fā)現(xiàn)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 魚類的免疫系統(tǒng)概述
        1.1.1 免疫器官和組織
        1.1.2 免疫細(xì)胞
        1.1.3 體液免疫因子
    1.2 魚類 T 細(xì)胞研究概況
        1.2.1 魚類 T 細(xì)胞的發(fā)生
        1.2.2 魚類 T 細(xì)胞表面標(biāo)志
2 牙鲆 CD3 的克隆及原核表達(dá)
    2.1 材料與試劑儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 RNA 提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 表達(dá)片段的擴(kuò)增、純化及雙酶切
        2.2.3 pET-30a 質(zhì)粒的抽提及雙酶切
        2.2.4 連接、轉(zhuǎn)化與陽性菌鑒定
        2.2.5 誘導(dǎo)表達(dá)及檢測(cè)
        2.2.6 蛋白層析純化及質(zhì)譜鑒定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 牙鲆 CD3 基因的克隆
        2.3.2 牙鲆 CD3 重組蛋白的表達(dá)與純化
        2.3.3 重組蛋白的鑒定
    2.4 討論
3 牙鲆 CD3 多克隆抗體的制備及分析
    3.1 材料與試劑儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 牙鲆 CD3 多克隆抗體的制備
        3.2.2 多克隆抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.2.3 牙鲆白細(xì)胞的采集
        3.2.4 免疫共沉淀分析
        3.2.5 雙熒光染色
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 牙鲆 CD3 多克隆抗體的效價(jià)
        3.3.2 CD3 多抗與牙鲆白細(xì)胞的免疫共沉淀
        3.3.3 雙熒光染色結(jié)果
    3.4 討論
4 牙鲆 CD3 多克隆抗體在 T 淋巴細(xì)胞鑒定中的應(yīng)用
    4.1 材料與試劑儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 牙鲆白細(xì)胞的采集
        4.2.2 免疫組織化學(xué)染色
        4.2.3 注射滅活愛德華氏菌后牙鲆組織中 T 細(xì)胞數(shù)量變化
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 牙鲆外周血白細(xì)胞的免疫組化結(jié)果
        4.3.2 牙鲆各組織的免疫組化結(jié)果
        4.3.3 滅活愛德華氏菌免疫后牙鲆組織中 T 細(xì)胞數(shù)量變化
    4.4 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
學(xué)術(shù)論文
榮譽(yù)獎(jiǎng)勵(lì)


【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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