多胺氧化酶（Polyamine oxidase, PAO）是單體的可溶性蛋白，F(xiàn)AD分子作為輔酶與PAO蛋白非共價結(jié)合,可以催化多胺和乙酰多胺的的氧化。因為多胺是細(xì)胞生長和分化的基礎(chǔ)調(diào)節(jié)者，它們的體內(nèi)平衡對細(xì)胞生命是非常重要的。酵母菌的多胺氧化酶（PAO）可以氧化精胺（Spermine，Spm）、N1-乙酰精胺（N1-acetylSpm）和N1-乙酰亞精胺（N1-acetylSpd）。在脊椎動物里，存在兩種不同的酶，即精胺氧化酶（Spermine oxidase，SMO）和乙酰多胺氧化酶（N1-acetylpolyamine oxidase，APAO），可以特異性地分別催化精胺和N-乙酰精胺以及N-乙酰亞精胺的氧化。目前，在非脊椎動物中沒有關(guān)于PAO功能的研究，所以現(xiàn)在急需非脊椎動物PAO結(jié)構(gòu)和功能研究。頭索動物文昌魚，是介于脊椎動物與無脊椎動物之間的一個過渡物種，一直以來被認(rèn)為是脊椎動物的祖先，也是研究脊椎動物起源和進(jìn)化的重要模式生物。本文首次克隆得到了青島文昌魚（Branchiostoma japonicum）的PAO基因（Bjpao），并對其進(jìn)行了相關(guān)生物信息學(xué)分析和功能研究。首... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 多胺氧化酶蛋白
        1.1 多胺的代謝
        1.2 多胺氧化酶蛋白及其氧化模式
        1.3 多胺氧化酶的功能
        1.4 多胺氧化酶的進(jìn)化
    2 文昌魚
        2.1 文昌魚概述
        2.4 文昌魚的起源與進(jìn)化
    3 研究目的和技術(shù)路線
        3.1 研究目的
        3.2 技術(shù)路線
第二章 文昌魚 PAO 基因的鑒定、表達(dá)和功能研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 青島文昌魚
            2.1.2 重要化學(xué)試劑
            2.1.3 重要儀器設(shè)備
            2.1.4 常用培養(yǎng)基配方
            2.1.5 常用溶液制備
            2.1.6 質(zhì)粒和菌株
            2.1.7 引物合成及 DNA 測序
        2.2 實驗方法
            2.2.1 青島文昌魚 PAO 基因的克隆
            2.2.2 序列分析
            2.2.3 實時熒光定量 PCR
            2.2.4 Bjpao 表達(dá)載體構(gòu)建
            2.2.5 重組蛋白 BjPAO 表達(dá)和純化
            2.2.6 定點突變實驗
            2.2.7 Western blotting 檢測重組蛋白 BjPAO 及其突變體
            2.2.8 青島文昌魚 rBjPAO 及其突變體的酶活測定
            2.2.9 青島文昌魚 rBjPAO 及其突變體的 Km 和 Vmax 值
    3 結(jié)果
        3.1 青島文昌魚 PAO 基因的序列
        3.2 多序列比對與分子系統(tǒng)發(fā)育分析
        3.3 青島文昌魚 PAO 基因結(jié)構(gòu)分析
        3.4 青島文昌魚 Bjpao 的組織特異性表達(dá)
        3.5 青島文昌魚 rBjPAO 的表達(dá)、純化和復(fù)性
        3.6 定點突變實驗
        3.7 青島文昌魚 rBjPAO 及其突變體的 Western blot 鑒定
        3.8 青島文昌魚 rBjPAO 及其突變體的酶活測定
        3.9 青島文昌魚 rBjPAO 及其突變體的 Km 和 Vmax 值的測定
    4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
發(fā)表論文



本文編號：3446431