G蛋白偶聯(lián)受體173（orphan G protein-coupled receptor:Gpr173）是一種在哺乳動物腦中表達(dá)的并高度保守的受體。Phoenixin（Pnx）是一種新發(fā)現(xiàn)的神經(jīng)肽,在小鼠中已證實(shí)Gpr173是Pnx的受體,兩者都參與了生殖調(diào)控。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn),金錢魚Pnx可以提高腦垂體中Gn RHR,LH和fsh等生殖相關(guān)基因的表達(dá)。但其受體Gpr173在金錢魚生殖調(diào)控中的作用及作用機(jī)理并不清楚。為此,本研究克隆了金錢魚Gpr173基因;分析了Gpr173基因的序列特征和在組織、性腺發(fā)育中的時空表達(dá)特征;雌二醇（E₂）和金錢魚Pnx以及DHA、EPA和油酸對Gpr173表達(dá)的影響、Gpr173對Pnx介導(dǎo)的基因表達(dá)和信號傳導(dǎo)通路的影響。本文擬闡明金錢魚Gpr173與Pnx間相互關(guān)系以及Gpr173在Pnx信號途徑中的作用。本研究結(jié)果有助于更深入地了解神經(jīng)肽對魚類生殖系統(tǒng)調(diào)控的機(jī)理,豐富和完善魚類乃至脊椎動物的生殖內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。具體研究結(jié)果如下:1.金錢魚Gpr173基因克隆及時空表達(dá)分析通過基因克隆獲得了兩種基因亞型（Gpr173-1和... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

配體Pnx與受體Gpr173在生殖調(diào)控中的信號通路（改自Treen等，2016）

Gpr173介導(dǎo)Phoenixin調(diào)控的金錢魚生殖功能的研究6圖1-2棕櫚酸鹽和BPA對Gpr173基因表達(dá)和Pnx信號通路的影響（改自EmmaK.McIlwraith等2019）Fig.1-2EffectsofpalmitateandBPAonGpr173geneexpressionandPnxsignalingpathways(ChangedfromEmmaK.McIlwraithetal.,2019)1.5研究目的和意義金錢魚（Scatophagusargus）俗稱金鼓，是一種具觀賞和食用價值的名貴海水經(jīng)濟(jì)魚類，環(huán)境適應(yīng)性極強(qiáng)，經(jīng)濟(jì)價值甚高，是近年我國南方沿海、尤其是廣東省粵西地區(qū)池塘和網(wǎng)箱養(yǎng)殖的重要對象。國際上金錢魚科僅金錢魚1屬3種，而分布在中國東南沿海的金錢魚是我國記錄在案的金錢魚科唯一物種[54,55]。因此，加強(qiáng)對金錢魚的基礎(chǔ)生物學(xué)研究，有助于我國對金錢魚物種資源的保護(hù)與利用。本實(shí)驗(yàn)室對金錢魚的生殖調(diào)控做了大量工作。如采用溫度、魚油等處理，發(fā)現(xiàn)在26℃時和高魚油水平（6%）可有效促進(jìn)該魚的卵巢發(fā)育[56,57]；雌激素受體在卵黃發(fā)生中的作用[58]；黑素皮質(zhì)素-4受體(melanocortin-4receptor)對生殖的影響[59,60]；芳香化酶的克隆與表達(dá)[61]；Spexin神經(jīng)多肽和Thimet脫寡肽酶和脯氨酰內(nèi)肽酶這兩種神經(jīng)肽酶對金錢魚生殖的影響[62]；Dmrt1是金錢魚在Y染色體上的性別決定基因[63,64]；Pnx可顯著增加金錢魚腦垂體中生長激素（GH）和生長激素釋放激素受體（Ghrhr）基因，肝臟中生長激素受體1（Ghr1）基因的表達(dá)，參與了生長攝食調(diào)節(jié)[65,66]；Pnx基因在金錢魚的下丘腦、腦垂體和性腺等生殖相關(guān)組織中表達(dá)含量較高，而且在性腺不同發(fā)育時期的下丘腦與腦垂體中Pnx

Gpr173介導(dǎo)Phoenixin調(diào)控的金錢魚生殖功能的研究14膜蛋白，都具有七個跨膜區(qū)域，跨膜方向?yàn)槟ね獾侥?nèi)。兩者序列結(jié)構(gòu)很相似，Gpr173-1氨基酸序列在第21-46具有一個低復(fù)雜度區(qū)域，在第56-78、91-113、128-150、167-189、218-240、319-341、351-373是其七個跨膜區(qū)域；同樣，Gpr173-2氨基酸序列，在第1-13、19-35具有一個低復(fù)雜度區(qū)域，在第48-70、83-105、120-142、159-181、210-232、311-333、343-365是其七個跨膜區(qū)域（圖2-1）。利用SWISS-MODEL在線軟件對金錢魚、尖吻鱸、斑馬擬麗魚、西方爪蟾、小鼠和人的Gpr173蛋白構(gòu)建3D結(jié)構(gòu)模型，結(jié)果顯示金錢魚Gpr173-1蛋白與尖吻鱸和斑馬擬麗魚的一種Gpr173三級結(jié)構(gòu)相似度高，而金錢魚Gpr173-2與尖吻鱸和斑馬擬麗魚另一種Gpr173三級結(jié)構(gòu)相似度高；而且，金錢魚的兩種亞型之間蛋白三級結(jié)構(gòu)的相似度較低；相比Gpr173-2型，金錢魚Gpr173-1型與鼠類相似度較高；金錢魚兩種Gpr173蛋白三級結(jié)構(gòu)與人的相比，結(jié)構(gòu)松散，人的三級結(jié)合更穩(wěn)定（圖2-2）。圖2-1預(yù)測的金錢魚Gpr173-1和Gpr173-2氨基酸序列跨膜區(qū)域和低復(fù)雜度區(qū)域簡圖。Fig.2-1SchematicdiagramofthetransmembraneregionandlowcomplexityregionofthepredictedaminoacidsequencesofGpr173-1andGpr173-2inScatophagusargus.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]饑餓及復(fù)投喂對金錢魚腸型脂肪酸結(jié)合蛋白基因表達(dá)的影響[J]. 劉建業(yè),陳華譜,江東能,吳天利,田昌緒,李廣麗,朱春華,鄧思平.  水生生物學(xué)報. 2019(04)
[2]反應(yīng)元件CRE和SRE參與豬CCR1和CCR5信號通路的分析[J]. 柴繼田,姜軍娜,李棟,王建兵,周家華,李穎穎,王志強(qiáng).  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2015(09)
[3]金錢魚腦型芳香化酶基因cDNA的克隆及表達(dá)分析[J]. 張敏智,李廣麗,朱春華,鄧思平.  海洋科學(xué). 2014(05)
[4]金錢魚性腺發(fā)育及其組織結(jié)構(gòu)觀察[J]. 崔丹,劉志偉,劉南希,張瑩瑩,張俊彬.  水產(chǎn)學(xué)報. 2013(05)
[5]金錢魚繁殖生物學(xué)及誘導(dǎo)產(chǎn)卵試驗(yàn)[J]. 蔡澤平,王毅,胡家瑋,張俊彬,林岳光.  熱帶海洋學(xué)報. 2010(05)
[6]ERK/c-Fos通路在Ang-（1-7）抑制Ang-Ⅱ誘導(dǎo)大鼠腎系膜細(xì)胞株增殖中的作用[J]. 賀紅焰,沈?qū)?劉建,史小玲,王明勇.  中國病理生理雜志. 2008(01)
[7]金錢魚生物學(xué)研究及回顧[J]. 蘭國寶,閻冰,廖思明,羅硯,謝若癡.  水產(chǎn)科學(xué). 2005(07)

碩士論文
[1]Phoenixin在金錢魚生長和生殖中的作用研究[D]. 王妹.廣東海洋大學(xué) 2019
[2]金錢魚DMRT1和GSDF在性別決定與分化中的功能初步研究[D]. Umar Farouk Mustapha.廣東海洋大學(xué) 2019
[3]豬OX2R基因分子克隆及其配體對cAMP信號通路的影響[D]. 藺帥.揚(yáng)州大學(xué) 2014



本文編號：3408068