為了研究卵形鯧鲹腫瘤壞死因子配體6（TNFSF6）的功能,本研究構(gòu)建了TNFSF6的原核表達(dá)載體并制備了其多克隆抗體,首先通過PCR擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增獲得了TroTNFSF6的開放閱讀框序列,并構(gòu)建了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-TroTNFSF6,隨后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達(dá)菌株BL21中,進(jìn)行原核表達(dá)并獲得重組蛋白rTroTNFSF6.結(jié)果顯示,重組蛋白rTroTNFSF6大小約46.5 kDa,其最適誘導(dǎo)溫度為20℃,誘導(dǎo)時(shí)間為8 h,IPTG的最佳濃度為0.6 mmol/L.可溶性分析表明,重組蛋白rTroTNFSF6主要在沉淀中,以包涵體的形式存在.將純化后的重組蛋白rTroTNFSF6免疫小鼠以制備多克隆抗體,ELISA檢測(cè)結(jié)果表明其效價(jià)高達(dá)1∶32 000.本研究為進(jìn)一步探究卵形鯧鲹TNFSF6的功能奠定了基礎(chǔ). 

【文章來源】：海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,38(02)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 質(zhì)粒和菌株
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 卵形鯧鲹TNFSF6基因的獲得與序列分析
        1.2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.4 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
        1.2.5 多克隆抗體的制備
        1.2.6 多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)
2 結(jié) 果
    2.1 卵形鯧鲹TNFSF6基因的獲得
    2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    2.3 原核重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
    2.4 多克隆抗體效價(jià)檢測(cè)
3 討 論



本文編號(hào)：3312703