本研究采用cDNA末端快速擴(kuò)增（RACE）等技術(shù)獲得海帶配子體細(xì)胞一個(gè)γ-亞型碳酸酐酶（CA）基因的cDNA及DNA全長(zhǎng)序列。其cDNA長(zhǎng)為1 618 bp,編碼由305個(gè)氨基酸組成的蛋白;DNA長(zhǎng)為11 812 bp,具6個(gè)內(nèi)含子,將開(kāi)放閱讀框（ORF）分割成7個(gè)外顯子;其具有一個(gè)gamma-CA的結(jié)構(gòu)域,并具有一個(gè)獨(dú)特的左手平行β-螺旋結(jié)構(gòu)域;由36個(gè)CA的氨基酸序列所構(gòu)建的聚類(lèi)圖顯示,該CA與其他物種的γ-CA聚為一支。因而,將該克隆的基因命名為Sjγ-CA。為了解其編碼蛋白的功能,將Sjγ-CA的ORF亞克隆至表達(dá)載體pET28a上,導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)菌株BL21中,培養(yǎng)并誘導(dǎo)目的基因表達(dá),親和層析以純化重組蛋白。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE電泳）、免疫印跡和質(zhì)譜技術(shù)鑒定結(jié)果表明,純化所獲得的重組蛋白是Sjγ-CA。利用電極法和分光光度計(jì)法分別檢測(cè)重組的Sjγ-CA在CO2與示,重組Sjγ-CA的水合酶比活力為0.82 U/mg,但沒(méi)有酯酶活性,從而從功能上鑒定了Sjγ-CA。該研究為后續(xù)探討Sjγ-CA在海帶配子體乃至孢子體細(xì)胞或組織中的亞細(xì)胞定位等研究奠定了基礎(chǔ)... 

【文章來(lái)源】：水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2020,44(05)北大核心

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人血小板衍生生長(zhǎng)因子BB亞型包涵體復(fù)性與純化[J]. 孫衛(wèi)國(guó),鄭本獻(xiàn),熊志紅,楊秉芬,劉艷華,張靈霞.  生物技術(shù)通訊. 2018(03)
[2]一種嗜熱型碳酸酐酶基因的克隆表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)[J]. 張朝暉,馬曉舟.  工業(yè)微生物. 2015(04)
[3]缺刻緣綠藻碳酸酐酶（CA）基因的序列克隆及特征分析[J]. 梅守華,畢燕會(huì),周志剛.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]海帶配子體中孢子形成相關(guān)蛋白（SRP）基因的克隆及其原核表達(dá)[J]. 陳晶,王麗麗,石微微,周志剛.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2010(08)

碩士論文
[1]對(duì)蝦溶菌酶重組蛋白在大腸桿菌表達(dá)及包涵體復(fù)性研究[D]. 張艷敏.大連工業(yè)大學(xué) 2014



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