金屬硫蛋白（metallothionein,MT）是一類普遍存在于生物體內(nèi)的低分子量（6-7KD）,富含半胱氨酸的金屬結(jié)合蛋白。MT對(duì)維持一些必需金屬的體內(nèi)代謝平衡及抵抗有毒金屬毒性、清除自由基有重要意義。近年來,MT和腫瘤的關(guān)系成為研究的熱點(diǎn)。MT參與腫瘤細(xì)胞增殖,凋亡,分化以及化療耐藥,影響治療和預(yù)后。課題組在前期承擔(dān)的國(guó)家自然科學(xué)基金（N0.30640051）中,不僅系統(tǒng)地研究了河南華溪蟹（Sinopotamon henanense）主要組織中MT的表達(dá)情況,MT與重金屬蓄積的關(guān)系,而且還完成了河南華溪蟹MT cDNA全長(zhǎng)序列的克隆。本論文在前期研究的基礎(chǔ)上,利用基因重組技術(shù),將河南華溪蟹MT基因亞克隆至phoA分泌型表達(dá)載體,構(gòu)建phoA-MT重組表達(dá)質(zhì)粒,導(dǎo)入大腸桿菌BL21（DE3）,利用低磷酸鹽誘導(dǎo),通過優(yōu)化培養(yǎng)基,誘導(dǎo)溫度,誘導(dǎo)時(shí)間和金屬離子誘導(dǎo)濃度實(shí)現(xiàn)了河南華溪蟹重組MT小分子功能性蛋白的體外原核表達(dá),并通過Ni親和層析柱對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行純化。之后,我們又通過紫外光譜掃描,羥自由基清除等實(shí)驗(yàn)對(duì)重組蛋白進(jìn)行了功能鑒定。結(jié)果表明phoA-MT分泌型表達(dá)載體構(gòu)建成功,工程菌經(jīng)... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１河南華溪蟹ＭＴ基因ＰＣ民護(hù)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳分析??

?放置時(shí)，從負(fù)極開始要按照四層濾紙－＞電泳膠－＾ＰＶＤＦ膜＾四層濾紙的順序放置如??圖３．１，然后蓋緊轉(zhuǎn)移槽，電壓１３?Ｖ，轉(zhuǎn)移３０?ｍｉｎ；??（５）

?放置時(shí)，從負(fù)極開始要按照四層濾紙－＞電泳膠－＾ＰＶＤＦ膜＾四層濾紙的順序放置如??圖３．１，然后蓋緊轉(zhuǎn)移槽，電壓１３?Ｖ，轉(zhuǎn)移３０?ｍｉｎ；??（５）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金屬硫蛋白在皮膚疾病中的研究進(jìn)展[J]. 薛燕,李大鐵.  中國(guó)美容醫(yī)學(xué). 2013(17)
[2]益生菌誘導(dǎo)合成金屬硫蛋白以及對(duì)自由基清除率和安全性研究[J]. 朱麗梅,李偉,張志焱,李金敏,張菊,劉海濤,谷巍.  飼料與畜牧. 2013(05)
[3]PET32a-IL-1RⅠ重組質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)[J]. 徐寧,張戰(zhàn)鋒,黃憲章,陳煒燁,何敏,莊俊華.  國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2011(09)
[4]在大腸桿菌周質(zhì)表達(dá)重組蛋白的研究進(jìn)展[J]. 李振國(guó),徐明波,牛罡,陳遙,姚文兵.  藥物生物技術(shù). 2011(01)
[5]金屬硫蛋白作為重金屬污染生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J]. 陳春,周啟星.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2009(03)
[6]金屬硫蛋白對(duì)鉛中毒兒童臨床干預(yù)觀察研究[J]. 李曉偉,魯曼.  中國(guó)兒童保健雜志. 2008(04)
[7]大腸桿菌高效表達(dá)重組蛋白策略[J]. 任增亮,堵國(guó)成,陳堅(jiān),吳敬.  中國(guó)生物工程雜志. 2007(09)
[8]金屬硫蛋白醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展[J]. 姚朝陽(yáng),朱文文,牛敬媛,郭偉云,邵強(qiáng),王天云,楊保勝.  微量元素與健康研究. 2007(03)
[9]中華絨螯蟹重組金屬硫蛋白的原核表達(dá)與分離純化[J]. 曹曉敏,李冰,陳禎,涂洪斌,付欣.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2007(02)
[10]金屬硫蛋白的研究進(jìn)展[J]. 張艷,楊傳平.  分子植物育種. 2006(S1)

碩士論文
[1]產(chǎn)金屬硫蛋白菌株的誘變育種及蛋白的分離提純[D]. 苗蘭蘭.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2013
[2]重組華溪蟹金屬硫蛋白在SUMO融合系統(tǒng)中的表達(dá)與純化及金屬螯合能力的研究[D]. 武陽(yáng).山西大學(xué) 2012
[3]河南華溪蟹重組金屬硫蛋白的原核表達(dá)[D]. 張志明.山西大學(xué) 2011
[4]金屬硫蛋白檢測(cè)方法的研究[D]. 王洋.吉林大學(xué) 2010
[5]SECM-SPR聯(lián)用技術(shù)研究硫蛋白與金屬離子的相互作用[D]. 辛銀玲.中南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3049574