派琴蟲（Perkinsus spp.）是海產(chǎn)貝類中的重要原生動(dòng)物寄生蟲,廣泛分布于世界各地。其中部分種類（P.marinus和P.olseni）能引起貝類派琴蟲病,導(dǎo)致貝類大量死亡,造成經(jīng)濟(jì)損失。鑒于派琴蟲對(duì)貝類的嚴(yán)重危害性,有必要對(duì)中國(guó)沿海分布的貝類寄生派琴蟲進(jìn)行物種多樣性和宿主多樣性研究,以便為派琴蟲病害的科學(xué)預(yù)防和監(jiān)測(cè)提供理論依據(jù)。本研究通過調(diào)查中國(guó)黃渤海、東海和南海常見貝類體內(nèi)派琴蟲的寄生狀況,確定派琴蟲的感染種類及地理分布;通過對(duì)廣西沿海貝類進(jìn)行季度監(jiān)測(cè),掌握派琴蟲的寄生宿主多樣性和流行規(guī)律;同時(shí)建立一種快速靈敏的實(shí)用檢測(cè)技術(shù)。主要研究結(jié)果如下:1、中國(guó)沿海三大海域中選取9個(gè)采樣地點(diǎn),利用PCR方法檢測(cè)8種貝類:太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）、香港牡蠣（C.hongkongensis）、縊蟶（Sinonovacula constrzcta）、菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）、毛蚶（Scapharca subcrenata）、皺肋文蛤（Meretrix lyrata）、皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai）、雜色鮑... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)原理（引自Boyleetal.,2014）

圖 2-1 采樣位點(diǎn)分布圖Fig 2-1 Distribution of the sampling locationsNA 提取，擴(kuò)增和測(cè)序了檢測(cè)派琴蟲的存在，用無菌剪刀和鑷子取一小塊固定的鰓樣品于 中，將乙醇晾干，利用蛋白酶 K 過夜消化后，參照軟體動(dòng)物組織 劑盒（美基生物，廣州）說明書提取樣品組織總 DNA，保存在-20用。用派琴蟲屬通用引物 PerkITS-85（5′-CCGCTTTGTTTGGMTCCC-3-750（5′-ACATCAGGCCTTCTAATGATG-3′）擴(kuò)增派琴蟲的核糖體 錄間隔區(qū)（ITS-1）序列，目的序列長(zhǎng)度為 703 bp[78]。PCR 體系如下2×PCR Mix 12.5 μL滅菌雙蒸水 9.5 μL上游引物 PerkITS-85 1 μL下游引物 PerkITS-750 1 μL

GenBank 中選取派琴蟲的代表序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，進(jìn)一步揭示派琴蟲種類之間的親緣關(guān)系。貝類派琴蟲感染率的定義參考 Bush 等[79]，是指某種貝類感染某種派琴蟲的數(shù)量占該檢測(cè)貝類樣品總數(shù)的比例。貝類派琴蟲總感染率是指該檢測(cè)貝類樣品中所有感染派琴蟲種類的貝類數(shù)量占該檢測(cè)貝類樣品總量的比例。使用 SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，派琴蟲的感染率顯著性差異采用卡方檢驗(yàn)，顯著性水平設(shè)置為 0.05。利用 Origin 8.0 軟件和 MEGA5 軟件作圖。2.3 結(jié)果分析2.3.1 派琴蟲及其宿主多樣性本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用 PCR 方法共檢測(cè)了 8 種貝類，1399 個(gè)樣品。根據(jù)比對(duì)結(jié)果及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析（圖 2-2），共檢測(cè)到三種派琴蟲，分別為 P. chesapeaki、P. olseni 和 P. beihaiensis。


本文編號(hào)：3028662