派琴蟲（Perkinsus spp.）是海產貝類中的重要原生動物寄生蟲,廣泛分布于世界各地。其中部分種類（P.marinus和P.olseni）能引起貝類派琴蟲病,導致貝類大量死亡,造成經濟損失。鑒于派琴蟲對貝類的嚴重危害性,有必要對中國沿海分布的貝類寄生派琴蟲進行物種多樣性和宿主多樣性研究,以便為派琴蟲病害的科學預防和監(jiān)測提供理論依據。本研究通過調查中國黃渤海、東海和南海常見貝類體內派琴蟲的寄生狀況,確定派琴蟲的感染種類及地理分布;通過對廣西沿海貝類進行季度監(jiān)測,掌握派琴蟲的寄生宿主多樣性和流行規(guī)律;同時建立一種快速靈敏的實用檢測技術。主要研究結果如下:1、中國沿海三大海域中選取9個采樣地點,利用PCR方法檢測8種貝類:太平洋牡蠣（Crassostrea gigas）、香港牡蠣（C.hongkongensis）、縊蟶（Sinonovacula constrzcta）、菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）、毛蚶（Scapharca subcrenata）、皺肋文蛤（Meretrix lyrata）、皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai）、雜色鮑... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組酶聚合酶擴增技術原理（引自Boyleetal.,2014）

圖 2-1 采樣位點分布圖Fig 2-1 Distribution of the sampling locationsNA 提取，擴增和測序了檢測派琴蟲的存在，用無菌剪刀和鑷子取一小塊固定的鰓樣品于 中，將乙醇晾干，利用蛋白酶 K 過夜消化后，參照軟體動物組織 劑盒（美基生物，廣州）說明書提取樣品組織總 DNA，保存在-20用。用派琴蟲屬通用引物 PerkITS-85（5′-CCGCTTTGTTTGGMTCCC-3-750（5′-ACATCAGGCCTTCTAATGATG-3′）擴增派琴蟲的核糖體 錄間隔區(qū)（ITS-1）序列，目的序列長度為 703 bp[78]。PCR 體系如下2×PCR Mix 12.5 μL滅菌雙蒸水 9.5 μL上游引物 PerkITS-85 1 μL下游引物 PerkITS-750 1 μL

GenBank 中選取派琴蟲的代表序列構建系統(tǒng)進化樹，進一步揭示派琴蟲種類之間的親緣關系。貝類派琴蟲感染率的定義參考 Bush 等[79]，是指某種貝類感染某種派琴蟲的數量占該檢測貝類樣品總數的比例。貝類派琴蟲總感染率是指該檢測貝類樣品中所有感染派琴蟲種類的貝類數量占該檢測貝類樣品總量的比例。使用 SPSS 20.0 軟件對數據進行分析，派琴蟲的感染率顯著性差異采用卡方檢驗，顯著性水平設置為 0.05。利用 Origin 8.0 軟件和 MEGA5 軟件作圖。2.3 結果分析2.3.1 派琴蟲及其宿主多樣性本實驗中，應用 PCR 方法共檢測了 8 種貝類，1399 個樣品。根據比對結果及系統(tǒng)進化樹分析（圖 2-2），共檢測到三種派琴蟲，分別為 P. chesapeaki、P. olseni 和 P. beihaiensis。


本文編號：3028662