目的：在羅非魚飼養(yǎng)階段中脂肪肝病頻頻發(fā)生,極大的阻礙了羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展步伐,本實驗通過增加日投飼率建立羅非魚脂肪肝病模型,應用iTRAQ聯合多維液相色譜串聯質譜技術（LC-MS/MS）篩選和鑒定健康羅非魚與脂肪肝病羅非魚之間的肝臟差異表達蛋白,深入分析肝臟脂肪病變過程中各差異蛋白對脂類代謝的影響,為檢測與防治羅非魚脂肪肝建立新思路。方法：根據前期研究,設計實驗組B日投飼率為體重10%,對照組A為6%,飼養(yǎng)八周后通過檢測肝指數、肝脂含量、相關肝生化指標和肝組織切片驗證羅非魚脂肪肝病模型的建立。每組取36尾魚,將36份肝臟樣品等量混合為一組,經蛋白酶切后用iTRAQ試劑標記；應用LC-MS/MS技術分離肝臟蛋白,并用軟件ProteinPilotTM Software 5.0 （AB Sciex）進行蛋白質數據檢索,得到可信的具有定量信息的蛋白,在錯誤發(fā)現率（false discovery rate） FDR<0.01的基礎上,設定兩組間表達量比值Ratio（B/A）>1.3或Ratio（B/A）<0.77為篩選差異表達蛋白上調或下調的閾值,將篩選到的差異蛋白進行GO分類... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 我國羅非魚產業(yè)發(fā)展概述
    1.2 魚類脂肪肝病研究現狀
    1.3 蛋白質組學技術在脂肪肝病上的應用
    1.4 研究目的與意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 脂肪肝病羅非魚模型的建立
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
        2.1.3 模型評分標準
    2.2 脂肪肝差異蛋白iTRAQ分析
        2.2.1 肝臟蛋白提取
        2.2.2 蛋白質定量
        2.2.3 蛋白酶切及iTRAQ試劑標記
        2.2.4 第一維高pH-RP液相分離
        2.2.5 第二維反相液質聯用RPLC-MS
        2.2.6 數據檢索
第三章 實驗結果
    3.1 肝體比、肝臟脂肪含量、肝臟生理指標
    3.2 肝臟組織學觀察
    3.3 iTRAQ脂肪肝差異蛋白質組學結果
        3.3.1 BCA Protein Assay Kit BSA蛋白濃度標準曲線
        3.3.2 鑒定質量評估
        3.3.3 肽段長度分布圖
        3.3.4 蛋白質鑒定結果與差異蛋白的篩選
        3.3.5 差異表達蛋白的GO分析
        3.3.6 差異蛋白的KEGG Pathway分析
        3.3.7 目的蛋白的挑選
第四章 討論
    4.1 動物脂肪肝模型的建立
        4.1.1 選擇建立脂肪肝模型的方法
        4.1.2 脂肪肝模型的評分標準
    4.2 炎癥反應相關差異蛋白與脂肪肝的關系
    4.3 胰島素抵抗相關差異蛋白與脂肪肝的關系
    4.4 叢生蛋白與SPARC蛋白與脂肪肝的關系
    4.5 脂肪、膽固醇合成相關差異蛋白與脂肪肝形成的關系
    4.6 參與脂肪分解途徑與NAFLD形成通路的差異蛋白與脂肪肝形成的關系
    4.7 參與脂肪轉運途徑的差異蛋白與脂肪肝形成的關系
第五章 結論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[6]扯根菜提取物對草魚脂肪肝的藥理作用研究[D]. 苗常鴻.四川農業(yè)大學 2012



本文編號：3018956