神經(jīng)壞死病毒（nervous necrosis virus,NNV）是病毒性神經(jīng)壞死癥（viral nervous necrosis,VNN）的主要傳染病原,感染全球多種海水和淡水魚類,在魚苗期的致死率可達(dá)100%,嚴(yán)重制約著全世界的魚類養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。由于魚苗特異性免疫系統(tǒng)發(fā)育不全,目前對于感染NNV的幼魚尚無有效的病毒防治措施。嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）是引起魚類細(xì)菌性敗血癥的主要致病菌。淡水魚類細(xì)菌性敗血癥在我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中危害魚類的種類最多、流行水域最廣的一種急性傳染病。由于抗生素的濫用導(dǎo)致大量耐藥菌株的發(fā)生,研發(fā)新的防治手段刻不容緩。卵黃免疫球蛋白（Immunoglobulin of yolk,IgY）來源于卵生動(dòng)物,經(jīng)血清轉(zhuǎn)移并富集至卵黃中,具有產(chǎn)量高、成本低和理化性質(zhì)穩(wěn)定的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于被動(dòng)免疫,尤其是免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全的幼仔。本研究制備了兩種特異性病原卵黃抗體。我們克隆并表達(dá)了赤點(diǎn)石斑神經(jīng)壞死病毒（Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV）的重組衣殼蛋白,并將其作為抗原免疫產(chǎn)... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

魚類野田病毒結(jié)構(gòu)模型圖

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位論文(CH1-CH3) 的 IgG 不同，IgY 的重鏈由一個(gè)可變區(qū) (VH) 和四個(gè)恒定，CH2和 CH3之間有兩個(gè)重鏈間二硫鍵，導(dǎo)致 IgY 分子量較 IgG鏈中，CH1和 CH2結(jié)構(gòu)域被鉸鏈區(qū)分開，使 Fab 片段（含有抗原結(jié)有靈活性和柔韌性。而 IgY 的重鏈不具有鉸鏈區(qū)，降低了 IgY 與和柔韌性，可能存在空間阻位，影響抗體-抗原結(jié)合，但也同時(shí)增。IgY 的等電點(diǎn)在 5.7 到 7.6 的范圍內(nèi)，低于 IgG 的等電點(diǎn) (6.疏水性 (Dávalos-Pantoja et al 2000)。另外 IgY C 區(qū) β 折疊低于哺乳動(dòng)域的構(gòu)象更無序，穩(wěn)定性較 IgG 更低。IgY 和 IgG 在生產(chǎn)和免疫見表 1-2。

后的 IgY (0.2 mg/mL) 與 1 MOI RGNNV 共孵育 2 h 后感染理后抗神經(jīng)壞死病毒卵黃抗體在 GF-1 細(xì)胞中的免疫保護(hù)效結(jié)果經(jīng)壞死病毒衣殼蛋白基因的克隆及表達(dá)蛋白基因片段的克隆NV 感染 GF-1 細(xì)胞的總 cDNA 為模板，使用特異性引物 p經(jīng)高保真 PCR 酶擴(kuò)增出特異性的神經(jīng)壞死病毒衣殼蛋白基4bp，如圖 2-1A 所示。純化后的基因片段和 pGEX-5X-1 進(jìn)一化后在長出菌落的含Amp的LB固體平板培養(yǎng)基上挑取3-CR 獲得陽性克隆菌并提取重組質(zhì)粒。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]魚類神經(jīng)壞死病毒納米探針的制備與特征分析[J]. 粟子丹,史成銀,劉江春,王勝強(qiáng).  中國動(dòng)物檢疫. 2015(06)
[2]魚類神經(jīng)壞死病毒研究進(jìn)展與發(fā)展趨勢[J]. 陳文捷,劉曉丹,胡先勤,王文文,秦真東,王瑤,周洋,劉小玲,林蠡.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2014(09)
[3]神經(jīng)壞死病毒在赤點(diǎn)石斑魚組織中的分布[J]. 劉曉丹,胡先勤,黃劍南,翁少萍,王文文,陳文捷,秦真東,董星星,周洋,劉小玲,姬偉,張學(xué)振,郭志勛,何建國,林蠡.  水生生物學(xué)報(bào). 2014(05)
[4]6株魚類病毒性神經(jīng)壞死病病毒cp基因的分子特征和遺傳發(fā)生分析[J]. 田飛焱,呂建強(qiáng),劉葒,李惠芳,劉宗曉,陳昌福.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2008(03)
[5]原位雜交技術(shù)在斜帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒檢測中的應(yīng)用[J]. 陳曉艷,何建國.  海洋科學(xué). 2008(06)
[6]產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）的兩種抗原制品對蛋雞免疫原性的對比研究[J]. 李曉宇,甄宇紅,金禮吉,徐永平.  中國免疫學(xué)雜志. 2006(11)
[7]赤點(diǎn)石斑魚病毒性神經(jīng)壞死癥的組織病理和電鏡觀察[J]. 林蠡,黃劍南,翁少萍,王云新,劉付永忠,張海發(fā),何建國.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2005(04)
[8]魚病毒性神經(jīng)壞死病病毒（VNNV）不同基因型鑒別方法的建立及在VNN檢疫和監(jiān)測中的應(yīng)用[J]. 劉葒,史秀杰,高隆英,何俊強(qiáng),江育林,陳煥春.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2004(06)
[9]閩南地區(qū)養(yǎng)殖石斑魚病毒性神經(jīng)壞死病初步研究[J]. 陳信忠,蘇亞玲,龔艷請,黃麗莎,俞秀霞,陳延坎.  福建水產(chǎn). 2003(03)
[10]魚類DNA疫苗的研究進(jìn)展[J]. 鄭天倫,王國良.  寧波大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版). 2002(04)

碩士論文
[1]致魚細(xì)菌性敗血癥嗜水氣單胞菌特異性卵黃抗體的制備及性能研究[D]. 鄒棟良.大連理工大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2955201