發(fā)布時(shí)間：2020-08-24 21:29

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)室利用紅鯽作母本,團(tuán)頭魴為父本進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交,后代有三種類型,天然雌核發(fā)育紅鯽(2n=100,一年性成熟),異源三倍體鯽魴(3n=124,不可育),異源四倍體鯽魴(4n=148,兩年性成熟)。將異源四倍體鯽魴進(jìn)行自交,后代中出現(xiàn)同源四倍體鯽魚(4n=200,一年性成熟)。將雌性同源四倍體鯽魚卵子進(jìn)行人工雌核發(fā)育,不需要進(jìn)行染色體加倍處理,F_1命名為G_1(2n=100,兩年性成熟),G_1中全部為雌性,未發(fā)現(xiàn)雄性個(gè)體。然后將G_1的卵子進(jìn)行雌核發(fā)育,未進(jìn)行加倍處理,后代命名為G_2(2n=100,兩年性成熟)�，F(xiàn)在已做到第三代G_3(2n=100)。將同源四倍體鯽魚卵子進(jìn)行雌核發(fā)育,因?yàn)槁炎訛槎扼w,相比于傳統(tǒng)二倍體魚雌核發(fā)育過程中不需要對(duì)卵子進(jìn)行加倍處理,大大提高了雌核發(fā)育的成活率。G系列作為二倍體魚可以穩(wěn)定產(chǎn)生二倍體配子,經(jīng)過連續(xù)雌核發(fā)育可以形成穩(wěn)定的品系。同時(shí)也為二倍體個(gè)體產(chǎn)生二倍體配子的研究提供了豐富的材料。由于G系列全部為雌性,所以在對(duì)魚類性別控制機(jī)制的研究提供了很好的實(shí)驗(yàn)材料。本研究對(duì)G系列的形態(tài)特征,繁殖特性以及遺傳特征進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。主要研究內(nèi)容如下:1、對(duì)一年齡同源四倍體鯽魚,紅鯽,G_1,G_2的可數(shù)性狀以及可量性狀進(jìn)行比較分析。比較結(jié)果表明同源四倍體鯽魚,紅鯽,G_1和G_2在可數(shù)性狀上和可量性狀上沒有顯著性差距。2、利用腎臟染色體制片計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀對(duì)血細(xì)胞DNA含量測(cè)定對(duì)同源四倍體,G_1,G_2的倍性以及染色體數(shù)目進(jìn)行了測(cè)定,測(cè)定結(jié)果顯示同源四倍體含有200條染色體,G系列含有100條染色體為二倍體魚。3、對(duì)一年齡紅鯽,同源四倍體鯽魚,G_1和兩年齡G_1個(gè)體的的卵巢結(jié)構(gòu)進(jìn)行組織切片觀察,結(jié)果表明一年齡紅鯽和同源四倍體鯽魚卵巢中充滿大生長期的III時(shí)相和IV時(shí)相初級(jí)卵母細(xì)胞,已進(jìn)入繁殖期。而一年齡G_1則充滿卵原細(xì)胞和少量II時(shí)相初級(jí)卵母細(xì)胞,兩年齡G_1則卵巢結(jié)構(gòu)與一年齡紅鯽和同源四倍體鯽魚相同。說明G_1相對(duì)于紅鯽和同源四倍體鯽魚晚一年性成熟,為兩年性成熟。4、在G_2孵化期間,對(duì)其雌核發(fā)育孵化率和成活率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示G系列雌核發(fā)育孵化率(38.25%)和成活率(37.13%)大大高于紅鯽雌核發(fā)育孵化率和成活率。5、對(duì)G_1及同源四倍體鯽魚和紅鯽的5SrDNA的結(jié)構(gòu)以及遺傳變異情況進(jìn)行了系統(tǒng)分析,結(jié)果顯示紅鯽、G_1基因組內(nèi)均有三種不同大小的5S rDNA結(jié)構(gòu)單元(203bp,340bp,477bp),同源四倍體基因組內(nèi)含有三種大小的5SrDNA結(jié)構(gòu)單元(203bp,340bp,485bp)。G_1完整繼承了紅鯽的5S rDNA全部的結(jié)構(gòu)單元,但其序列中也發(fā)生了部分的變異和重組現(xiàn)象。6、對(duì)紅鯽,同源四倍體鯽魚,G系列和團(tuán)頭魴染色體進(jìn)行熒光原位雜交,探針為紅鯽5SrDNA477bp序列。結(jié)果顯示紅鯽有8個(gè)熒光結(jié)合位點(diǎn),團(tuán)頭魴沒有熒光結(jié)合位點(diǎn),同源四倍體鯽魚為紅鯽的兩倍有16個(gè)熒光結(jié)合位點(diǎn),G系列和紅鯽一樣有8個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。本研究成功研制了可以連續(xù)進(jìn)行雌核發(fā)育形成穩(wěn)定品系的G系列。相對(duì)于傳統(tǒng)雌核發(fā)育具有非常高的孵化率和存活率,雖然G系列兩套染色體全部來源與紅鯽,與紅鯽發(fā)生了一定的變異,但是G系列可以穩(wěn)定產(chǎn)生二倍體卵子,為今后探索二倍體個(gè)體產(chǎn)生二倍體配子的研究提供了豐富的原材料,以及在今后的雜交育種中提供了大量的二倍體卵子。G系列的全雌后代為今后性別調(diào)控的機(jī)制研究提供非常重要的原材料。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

如圖 2-1 所示 A：同源四倍體鯽魚染色體數(shù)目圖， B：紅鯽染色體數(shù)目圖，C：4色體數(shù)目圖，D：G1染色體數(shù)目圖。圖中比例尺為 3μm.Fig.2-1. (A)Chromosome spreads of autotetraploid crucian carp; (B)Chromosome spr Red crucian carp; (C)Chromosome spreads of 4nRG; (D)Chromosome spreads of G1; b

圖 2-2 紅鯽、同源四倍體、G1、G2的細(xì)胞流式圖。A：紅鯽的平均 DNA 含量（峰 1:100.57）；B：同源四倍體的平均 DNA 含量（峰 1：205.01）；C：G1平均 DNA 含量（峰 1:97.15）；D：G2的平均 DNA 含量（峰 1:103.71）。

圖 3-1 紅鯽、同源四倍體鯽魚、G1、G2外形圖。A：紅鯽；B：同源四倍體，C：G1, D: G2外形圖 。（圖中標(biāo)尺為 1cm）Fig. 3-1. Morphological appearance of RCC, 4nRR, G1and G2.(A) RCC; (B) 4nRR; (C) G1;(D)G2;bar in A-D, 1cm.

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本文編號(hào)：2802883