【摘要】：中華鱉(Pelodiscus sinensis)屬于爬行綱(Reptilia),龜鱉目(Testudines),鱉科(Trionychidae),鱉屬(Pelodiscus),是我國(guó)重要的特種經(jīng)濟(jì)水產(chǎn)動(dòng)物之一,其雌雄間生長(zhǎng)具有較大差異,性成熟后同齡雄鱉的體重約為雌鱉的1.5-2倍。性激素是性別分化、發(fā)育過程中的關(guān)鍵因素,影響著性分化的方向。本研究通過在稚鱉飼料中添加一定劑量的類固醇激素,分析經(jīng)短期連續(xù)飼喂后,激素對(duì)稚鱉各生長(zhǎng)指標(biāo)、血清激素含量及性腺發(fā)育的影響,研究結(jié)果如下:1、性類固醇激素處理對(duì)中華鱉稚鱉生存及生長(zhǎng)的影響(1)不同劑量雌二醇處理后對(duì)稚鱉的存活率無(wú)顯著影響,而甲基睪酮不同劑量處理均顯著降低了稚鱉的存活率;(2)不同劑量雌二醇處理組中,20 mg/kg劑量組稚鱉體重、背甲長(zhǎng)及背甲寬的相對(duì)生長(zhǎng)率與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P0.05),其余各劑量組均使稚鱉體重、背甲長(zhǎng)及背甲寬的相對(duì)生長(zhǎng)率顯著下降(P0.05),表現(xiàn)為對(duì)稚鱉生長(zhǎng)的抑制;(3)不同劑量甲基睪酮處理組均表現(xiàn)出使稚鱉體重、背甲長(zhǎng)、背甲寬相對(duì)生長(zhǎng)率的顯著下降效應(yīng)(P0.05);(4)不同劑量的兩種激素對(duì)稚鱉尾長(zhǎng)的增長(zhǎng)均有顯著的促進(jìn)作用,其中甲基睪酮作用更明顯(P0.05)。2、性類固醇激素處理對(duì)中華鱉稚鱉血清性激素及性腺發(fā)育的影響采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)不同劑量雌二醇及甲基睪酮處理后的稚鱉血清中E_2、T含量,結(jié)果顯示:(1)不同劑量雌二醇處理均使稚鱉血清中E_2含量顯著升高(P0.05),T含量有一定程度的降低;(2)不同劑量甲基睪酮處理均使稚鱉血清中T含量顯著升高(P0.05),同時(shí)E_2含量也顯著上升(P0.05);(3)觀察經(jīng)不同劑量性類固醇激素處理后的性腺切片,發(fā)現(xiàn)雌二醇能促進(jìn)卵巢的發(fā)育,卵徑及卵原細(xì)胞數(shù)目均大于對(duì)照組,而甲基睪酮處理則相反;(4)稚鱉期中華鱉精巢發(fā)育緩慢,本實(shí)驗(yàn)中未觀察到兩種激素對(duì)精巢發(fā)育有明顯的影響。3、中華鱉GnRH 1基因的克隆及表達(dá)特征分析以中華鱉成鱉全腦組織RNA為模板,使用末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)得到中華鱉GnRH 1基因cDNA全長(zhǎng)序列,并運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)分析了GnRH 1的表達(dá)特征。結(jié)果顯示:(1)中華鱉GnRH 1基因cDNA全長(zhǎng)546 bp,其中開放閱讀框(ORF)279 bp,編碼92個(gè)氨基酸;(2)系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示,中華鱉GnRH 1基因和綠海龜、墨西哥箱龜及西部頸龜GnRH 1基因聚為一支,親緣關(guān)系較近;(3)生物信息學(xué)分析可知GnRH 1基因編碼蛋白為分泌蛋白,具有信號(hào)肽;(4)qRT-PCR結(jié)果表明,中華鱉GnRH 1基因在檢測(cè)的雌雄成鱉8個(gè)組織中均表達(dá),且在腦和性腺組織中高表達(dá)(P0.05);在胚胎發(fā)育時(shí)期隨發(fā)育時(shí)間的后移,表達(dá)量顯著增高(P0.05)。研究表明GnRH 1基因可能在中華鱉生長(zhǎng)及性腺分化中具有重要作用。
【圖文】：

采用 ELISA 方法檢測(cè)激素含量，需先利用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線soft Excel 繪制標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，將實(shí)驗(yàn)測(cè)得度值作縱坐標(biāo)，得出方程 y=ax+b 及相關(guān)系數(shù) R2，通過相關(guān)系數(shù)判定擬合方；當(dāng)建立的回歸方程式的相關(guān)系數(shù) R2大于 0.99 時(shí)，符合標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建要求續(xù)試驗(yàn)；各樣本濃度值可通過擬合得到的回歸曲線方程計(jì)算得出。2.1.1雌二醇標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、4、8、16、32、64pmol/L，根據(jù) ELISA 實(shí)儀測(cè)定對(duì)應(yīng)的 OD 值，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖 3-1，A）。其中得到回歸方程為 y=0527，相關(guān)系數(shù) R2為 0.9961，符合測(cè)定要求。2.1.2睪酮標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320pg/mL，根據(jù) ELISA 標(biāo)儀測(cè)定對(duì)應(yīng)的 OD 值，結(jié)果得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖 3-1，B）。其中得到回歸方程76x + 0.1005，相關(guān)系數(shù) R2為 0.9915，符合測(cè)定要求。

1基因 mRNA 在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)分析引物 qGnRH 1 和內(nèi)參引物 18S rRNA 檢測(cè) GnRH 1 基因胚胎發(fā)育的第 8 期、第 10 期至第 18 期共 10 個(gè)時(shí)期胚胎取樣以 Tokita[132]的分期標(biāo)準(zhǔn)為參照，實(shí)驗(yàn)參照 2.4.6.2 分析測(cè)各組織 RNA，其吸光度比值均分布在 2.0 附近，達(dá)到泳檢測(cè)，可得 28S 和 18S 兩條清晰的帶，且 28S 條帶條帶幾乎看不到，，說明提取 RNA 質(zhì)量較好，符合下游實(shí)MM
【學(xué)位授予單位】：新疆大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S917.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 冰賓;中華鱉精與提干口服液[J];政工學(xué)刊;1994年08期

2 文丙;;中華鱉精(外一則)[J];雨花;1995年02期

3 陳敏;;新東方教育集團(tuán)副總裁、職業(yè)規(guī)劃專家徐小平:這個(gè)社會(huì)要的是“中華鱉精”[J];中國(guó)青年;2004年11期

4 王書勤,白善祥;中華鱉精致蕁麻疹2例報(bào)告[J];中國(guó)基層醫(yī)學(xué);1995年S1期

5 柳友榮;;公關(guān)促銷例話[J];銷售與市場(chǎng);1994年06期

6 王放;馬家軍和鱉精 別把事情弄糊了[J];當(dāng)代電視;1995年01期

7 朱道玉;吳紅松;;中華鱉精巢發(fā)育的組織學(xué)觀察[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年22期

8 一胡;女大學(xué)生的吃香與受冷落[J];中國(guó)大學(xué)生就業(yè);2005年01期

9 趙魁;“圣達(dá)”中華鱉精向更大的生產(chǎn)規(guī)模進(jìn)軍[J];中國(guó)信息導(dǎo)報(bào);1995年04期

10 翟越;馬家軍“專用”什么?——“理科蟲草王”欲與“中華鱉精”上法庭[J];當(dāng)代體育;1994年10期

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 虛子 整理;榮譽(yù)不該只是一劑“中華鱉精”[N];上海法治報(bào);2016年

2 梅丁;打折時(shí)代[N];江蘇經(jīng)濟(jì)報(bào);2000年

3 蔣悅飛 陳穗華;年輕海歸不敵“中華鱉精”[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

4 施文;廣告與消費(fèi)[N];中國(guó)審計(jì)報(bào);2003年

5 何祚庥;一本大有益于健康的書[N];中國(guó)圖書商報(bào);2007年

6 鄧海建;“馬家軍真相”會(huì)是一角冰山嗎？[N];檢察日?qǐng)?bào);2016年

7 鄧海建;“馬家軍真相”掀開冰山一角[N];上海金融報(bào);2016年

8 趙守訓(xùn);中藥現(xiàn)代化芻議（下）[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

9 柳書節(jié);甲魚：低谷孕育高潮 生態(tài)養(yǎng)殖可為[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊振才;中華鱉孵化生態(tài)學(xué)的研究[D];北京師范大學(xué);1997年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 申慧;飼喂類固醇激素對(duì)中華鱉稚鱉生長(zhǎng)、血清性激素及性腺發(fā)育的影響[D];新疆大學(xué);2019年

2 趙巖巖;中華鱉figla基因的克隆及其在性腺中的表達(dá)分析[D];上海海洋大學(xué);2018年

3 唐舟凱;中華鱉dazl、boule基因的克隆及在生殖細(xì)胞中的表達(dá)分析[D];浙江海洋大學(xué);2018年

4 胡莉斯;中華鱉精子及附睪中Toll-like receptor 2/4的表達(dá)及其與精子儲(chǔ)存的關(guān)系的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2709883