【摘要】：東北林蛙,是分布于我國(guó)東北地區(qū)的一種重要的兩棲類(lèi)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,其在冬眠前期特異性膨大的輸卵管曬干后可制成著名中藥“林蛙油”,而其輸卵管在冬眠前期特異性膨大的生理學(xué)現(xiàn)象的機(jī)理尚不清楚。冬眠前膨大的東北林蛙輸卵管中富含脂質(zhì),為冬眠中的機(jī)體提供能量。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),瘦素和脂聯(lián)素,作為脂肪分泌的兩種重要激素,具有調(diào)控?cái)z食、能量代謝、生長(zhǎng)發(fā)育和生殖等多種生物學(xué)功能。本項(xiàng)研究的目的是以野生雌性東北林蛙為研究對(duì)象,調(diào)查瘦素和脂聯(lián)素在東北林蛙輸卵管中表達(dá)位置及表達(dá)水平的季節(jié)性變化,評(píng)價(jià)瘦素和脂聯(lián)素在東北林蛙輸卵管季節(jié)變化中的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)材料采樣于我國(guó)東北吉林省吉林市,分別于4月繁殖期與10月冬眠前期采集野生雌性東北林蛙,獲得輸卵管組織,進(jìn)行形態(tài)組織學(xué)觀察,免疫組織化學(xué),免疫印跡,ELISA與實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)形態(tài)組織學(xué)結(jié)果顯示東北林蛙輸卵管的重量與周徑大小從繁殖期至冬眠前期顯著上升,東北林蛙輸卵管的組織結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)顯著的變化；輸卵管的組織學(xué)結(jié)果顯示冬眠前期輸卵管的黏膜上皮細(xì)胞少纖毛,固有層管狀腺體積大,腺細(xì)胞界限模糊,而繁殖期卻與之相反,表現(xiàn)為黏膜上皮細(xì)胞多纖毛,固有層管狀腺體積小,腺細(xì)胞界限清晰。(2)東北林蛙輸卵管中PCNA與PPARy2的免疫組織化學(xué)顯示兩個(gè)時(shí)期輸卵管均有表達(dá)；免疫印跡結(jié)果顯示PPARy2在冬眠前期輸卵管中的免疫活性顯著高于繁殖期,而PCNA沒(méi)有明顯變化。(3)在繁殖期與冬眠前期的東北林蛙輸卵管中,瘦素的免疫定位在林蛙輸卵管的黏膜上皮細(xì)胞,而瘦素受體定位在固有層腺細(xì)胞；免疫印跡結(jié)果顯示在冬眠前期輸卵管中的瘦素與瘦素受體的免疫活性顯著高于繁殖期；ELISA結(jié)果顯示冬眠前期的輸卵管總蛋白瘦素的含量高于繁殖期；瘦素受體的實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果也顯示了瘦素受體mRNA的表達(dá)量相對(duì)于繁殖期,在冬眠前期有顯著提升。脂聯(lián)素與其受體在兩個(gè)時(shí)期的輸卵管均有陽(yáng)性表達(dá)；免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯示了冬眠前期脂聯(lián)素的免疫活性顯著低于繁殖期。這些結(jié)果表明,東北林蛙輸卵管在冬眠前特異性膨大可能是細(xì)胞增殖與脂類(lèi)物質(zhì)積累共同作用的過(guò)程,瘦素和脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān),協(xié)同在東北林蛙輸卵管的季節(jié)性變化中起著重要的自分泌／旁分泌調(diào)節(jié)作用。
【圖文】：

逡逑果如圖３－３所示。ＰＣＮＡ和ＰＰＡＲｙ２在兩個(gè)時(shí)期均有表達(dá)并定位于輸卵管炥膜上皮細(xì)逡逑胞核和固有層的腺細(xì)胞核（圖３－３ａ－ｄ）。冬眠前期的ＰＣＮＡ的免疫信號(hào)強(qiáng)度與繁殖期逡逑相似，而冬眠前期的ＰＰＡＲｙ２的免疫組化信號(hào)強(qiáng)度均要高于繁殖期的信號(hào)強(qiáng)度。用正逡逑常兔血清處理的陰性對(duì)照組切片則沒(méi)有免疫陽(yáng)性表達(dá)（圖３－３邋ｅ，邋ｆ）。逡逑繁殖期邐冬眠前期逡逑ｒｒ－＾邋＇邐／逡逑W：分逡逑ｐ－瞧灥ｆｅ、耀逡逑——邐－邐Ｉ邋｜．邐１，，邋？－邋■邋：？逡逑＊邋？？邐＿■邐，，邋？邋Ｉ邐．逡逑ｔｇ＾邐‘邐ｒ、個(gè)逡逑，Ｕ邋Ｊ逡逑、‘－邋．逡逑５０邋ｐｏｉ邐５０邋＼ｋｍ逡逑ａ和ｂ．四月繁殖期（ａ）和十月冬眠前期（ｂ）的雌性東北林蛙輸卵管中ＰＣＮＡ的免疫組織化學(xué)的定位表達(dá)。ｃ和ｄ．四逡逑月繁殖期（Ｃ）和Ｉ？月冬眠前期⑷的東北林魅輸卵管中ＰＰＡＲｙ２的免疫組織化學(xué)的定位表達(dá)。ｅ和ｆ．正常兔血清處逡逑理的陰性對(duì)照組。標(biāo)尺為５（Ｈｉｎｉ。左下角均為表達(dá)位點(diǎn)的局部放大圖。ＥＣ為炥膜上皮細(xì)胞，ＴＧ為炥膜同有層管逡逑狀腺

Ｐ－ａｃｔｉｎ蛋Ａ作為內(nèi)參蛋Ａ在各月份輸卵管組織中表達(dá)量一致。免疫印跡條帶光密度分析量化結(jié)果圖中，＊＊＊表示逡逑差界極顯著（ｐ＜０．００１）。逡逑圖３－６邋ｌｅｐｔｉｎ和ｌｅｐｔｉｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ在繁殖期和冬眠前期林蛙輸卵管中的免疫印跡結(jié)杲逡逑ａ邋＆邋ｂ）邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｌｅｐｔｉｎ邋（ａ）邋ａｎｄ邋ｌｅｐｔｉｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ邋（ｂ）邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅｓ邋ｏｆ邋Ｒａｎａ邋ｄｙｂｏｗｓｋｉｉ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｔｈｅ邋ｂｒｅｅｄｉｎｇ逡逑ｐｅｒｉｏｄ邋ａｎｄ邋ｐｒｅ－ｈｉｂｅｍａｔｉｏｎ．邋Ｔｏｔａｌ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｗａｓ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ邋ｐｅｒｉｏｄ邋（ｌａｎｅ邋Ｂ）．邋Ｔｏｔａｌ逡逑ｐｒｏｔｅｉｎ邋ｅｘｔｒａｃｔｅｄ邋ｆｒｏｍ邋ｔｈｅ邋ｏｖｉｄｕｃｔ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｅ－ｈｉｂｅｍａｔｉｏｎ邋（ｌａｎｅ邋Ｐ）邋ａｎｄ邋ａｄｉｐｏｓｅ邋ｔｉｓｓｕｅ邋（ｌａｎｅ邋ＰＣ）邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋Ｒａｔ邋ｕｓｅｄ邋ｆｏｒ逡逑ｔｈｅ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ，，邋ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．邋Ｐｒｉｍａｒｙ邋ａｎｔｉｂｏｄｙ邋ｒｅｃｌａｉｍｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｆｕｌｌ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋（ｌａｎｅ邋ＮＣ）邋ｗａｓ邋ｕｓｅｄ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ．邋Ｍｅａｎ邋ｖａｌｕｅｓ邋ｗｉｔｈｉｎ邋ｔｈｅ邋ｃｏｌｕｍｎｓ邋ｍａｒｋｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ａｓｔｅｒｉｓｋ邋ｗｅｒｅ邋ｕｓｅｄ邋ｔｏ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋（＊＊＊
【學(xué)位授予單位】：北京林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S966.35

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 楊正文;張令龍;崔玉申;;中國(guó)林蛙的生活習(xí)性[J];農(nóng)村科學(xué)實(shí)驗(yàn);2004年10期

2 張繼峰;肥胖基因的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

3 佟巖,徐峰,陳俠,王天成,劉廣宣,彭飛;中國(guó)林蛙卵油的抗焦慮作用[J];沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年01期

4 黎瑤,童南偉;過(guò)氧化物酶增殖物激活受體α與脂質(zhì)代謝[J];中華糖尿病雜志;2005年02期

5 劉麗麗,喬杰,王玉真,陳詠健,高雅琴;瘦素及其受體系統(tǒng)在女性生殖器官的表達(dá)[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2003年08期

6 賽慶彬;馬延超;朱榮;;有氧運(yùn)動(dòng)抑制心力衰竭大鼠心臟脂質(zhì)沉積:AMPK-PPARα信號(hào)通路的作用[J];中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志;2012年12期

本文編號(hào)：2653589