發(fā)布時(shí)間：2020-04-24 00:34

【摘要】：凡納濱對蝦,又名南美白對蝦,因其抗逆性強(qiáng)、生長快、繁殖期長、肉味鮮美、耐低鹽度且易于集約化養(yǎng)殖等優(yōu)點(diǎn),成為世界三大對蝦養(yǎng)殖品種之一。由于養(yǎng)殖環(huán)境的惡化、親蝦種質(zhì)退化、加之近年來各種病害的爆發(fā),對我國整個(gè)凡納濱對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成巨大的沖擊。因此,深入開展凡納濱對蝦良種的選育,已成為我國凡納濱對蝦產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的當(dāng)務(wù)之急。本文以關(guān)島大學(xué)SPF凡納濱對蝦種群中經(jīng)系統(tǒng)選育的子五代為親本,運(yùn)用人工授精方式得到的10個(gè)凡納濱對蝦子代家系,比較海水(鹽度32)和淡化(鹽度2)養(yǎng)殖條件下,不同家系的生長性能及相關(guān)基因的表達(dá)情況,選育優(yōu)良生長性能與更適淡化養(yǎng)殖的凡納濱對蝦家系,為凡納濱對蝦的良種選育提供參考,具體研究內(nèi)容結(jié)果如下:1.本試驗(yàn)通過精液移植人工授精方式的初步探索,并以此方法培育出的10個(gè)新的凡納濱對蝦家系作為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)材料。該人工授精法是通過將雄蝦精莢的豆?fàn)铙w精液直接涂抹到雌蝦的納精囊上的方式,研究不同雌雄親蝦的體重對授精成功率、受精率及孵化率的影響,并通過與其他學(xué)者的其它人工授精方式的比對,分析此方法的優(yōu)劣。結(jié)果表明:當(dāng)雌蝦體重≥40g、雄蝦≥35g時(shí),該方法具有較高的授精成功率,當(dāng)雌蝦體重小于40g,雄蝦小于35g時(shí),其授精成功率和受精率達(dá)到最低;受精率方面,雌蝦體重為W(40-45g)時(shí)達(dá)到最高,W(≤40g)時(shí)最低,由高到低為:W(40-45g)W(≥50g)W(45-50g)W(≤40g);當(dāng)雄蝦體重為W(40-45g)時(shí),受精率也達(dá)到最高,W(≤35g)時(shí)受精率最低,由高到低分別為:W(40-45g)W(35-40g)W(≥45g)W(≤35g)。平均孵化率方面,體重為W(40-45g)的雌蝦孵化成功率最低,體重為W(≥50g)的最高,由高到低位W(≥50g)W(≤40g)W(45-50g)W(40-45g);雄蝦由高到低為:W(≥45g)W(45-50g)W(40-45g)W(≤35g)。但總體受精率和孵化率比其它學(xué)者報(bào)道的結(jié)果低許多,分析原因可能是:1、育苗期間水溫太高,育苗期間水溫均達(dá)到29℃以上,其中在實(shí)驗(yàn)期,水溫達(dá)到30-31℃,高于最適育苗溫度。同時(shí),孵化所用桶體積較小(100L),且由于水溫太高,孵化過程中常發(fā)現(xiàn)水面有油狀物漂浮,導(dǎo)致孵化桶的水質(zhì)極易變差。2、親蝦在繁殖期間,營養(yǎng)攝入的不夠。隨著繁殖周期逐漸變長,性腺中存儲(chǔ)的能夠轉(zhuǎn)移給卵子營養(yǎng)物和能量越來越少,當(dāng)攝入營養(yǎng)跟不上的時(shí)候,就容易導(dǎo)致卵子質(zhì)量下降,直接使得授精率和孵化率下降。2.本試驗(yàn)利用第一章節(jié)人工授精培育的10個(gè)子代家系作為實(shí)驗(yàn)材料,在兩種鹽度(鹽度32和鹽度2)養(yǎng)殖中生長性能對比的研究,分析各個(gè)家系兩種鹽度中生長性能的表現(xiàn)差異,結(jié)果表明:各個(gè)家系之間表現(xiàn)出不同的日均增重率,其中家系5最高、家系1最低,家系5為家系1的7倍左右,各家系日均增重率由高到低分別為:家系5家系9家系6家系3家系10家系8家系7家系4家系2家系1;家系5和家系9表現(xiàn)出較優(yōu)的生長特性,日均增重率率分別達(dá)到21.91%和18.43%,家系6和家系7在低鹽度中的日均增重率高于其在海水中的值,說明家系6、7在低鹽度中相比于高鹽度更具有生長優(yōu)勢。在兩種鹽度下的成活率對比,發(fā)現(xiàn)除了家系2之外,低鹽組的成活率普遍較高鹽度組低,且在兩種鹽度中,其成活率存在顯著性差異。對比在不同階段特定生長率:在0-44d的養(yǎng)殖日齡高、低鹽度組均為快速生長時(shí)期,但高鹽度組其特定生長率高于低鹽度組;在44d養(yǎng)殖日齡之后,各家系的生長放緩,進(jìn)入穩(wěn)定生長時(shí)期,低鹽度組各家系的特定增重率開始高于高鹽度組。其中,家系5、9在兩種鹽度下,各個(gè)時(shí)期的特定生長率都大于其它家系,其生長性能在各個(gè)階段都優(yōu)于其它各組。3.本試驗(yàn)選取ATP合成酶、Na~+-K~+-ATPase和Toll受體基因三對基因,對第二章中10個(gè)凡納濱對蝦家系的不同組織相對表達(dá)差異進(jìn)行研究,并結(jié)合生長狀況,分析在以后良種選育中的優(yōu)缺點(diǎn),結(jié)果表明:在低鹽度中,家系4、5、6、7、8的ATP合成酶的相對表達(dá)量顯著高于其它幾個(gè)家系,且主要在肌肉中表達(dá);家系1、2、3、9、10相對表達(dá)量則較低。鰓組織中Na~+-K~+-ATP酶的表達(dá)均高于高鹽度組家系,其中家系5、6、7、9的表達(dá)相對較低,家系1、2、3、4的表達(dá)則相對較高。Toll基因表達(dá)上,家系1、2、3、8、10的表達(dá)量較高,說明機(jī)體受環(huán)境因子變化的影響較大,機(jī)體處于易感狀態(tài),家系5、6、7、9的表達(dá)量則較低,抗環(huán)境變化的能力與機(jī)體穩(wěn)定性更強(qiáng)。家系5、6的ATP合成酶相對表達(dá)量高,Na~+-K~+-ATPase及Toll樣受體基因表達(dá)低,結(jié)合其生長性能,說明家系5、6機(jī)體合成大量的ATP,且主要用于機(jī)體的生長;家系8在Na~+-K~+-ATPase及Toll樣受體基因的表達(dá)都比較高,也說明機(jī)體消耗了大量能量在滲透壓調(diào)節(jié)和機(jī)體免疫過程中。高鹽度組中,ATP合成酶表達(dá)高低主要情況為:家系4、5、6、7、8在ATP合成酶的表達(dá)量較高,不同于低鹽度組,其主要在肝胰腺中表達(dá),家系1、2、3、9、10的表達(dá)則相對較低。;高鹽度組水體鹽度為自然海水鹽度,各家系Na~+-K~+-ATPase的表達(dá)量均比較低,機(jī)體無需消耗大量能量在滲透壓調(diào)節(jié)中;在Toll樣受體基因總體的表達(dá)上,家系4、5、6、8的表達(dá)量相對較低,家系7、9、10的表達(dá)較高。同樣在不分配太多能量到調(diào)節(jié)滲透壓的高鹽度組中,家系5、6、7、8、合成大量ATP,Toll受體表達(dá)低的情況下,家系5、6將能量主要用于機(jī)體生長,故表現(xiàn)出較好生長性能;綜上所述家系5、6在高低兩種鹽度中的能量利用都更加合理,其生長性能也更佳,可以作為具有優(yōu)異生長特性的家系進(jìn)行后期的選擇育種;家系6、7在低鹽度組中,表現(xiàn)出比高鹽度組更好的生長性能,可以作為選擇更加適合淡水生長的家系進(jìn)行良種選育。
【圖文】：

(d)圖 3-1 3 對引物在不同組織表達(dá)差異情況的檢測(部分),上樣 4ul a，圖 b，圖 c，圖 d 分別是凡納濱對蝦 18S、LvToll、APT synthase 和 Na+/K+-ATP分別在肌肉、鰓、血淋巴和肝胰腺中的擴(kuò)增結(jié)果Fig.3-1 Discrepancy in different tissues of 3 genes expression，Sample volume 4.0μLFig a,b,c,dis the PCR amplification result in mouscle,gill, hemolymph, hepatopancreasof 18LvToll,APT synthase and Na+/K+-ATPase，，respectively從擴(kuò)增結(jié)果可知，大部分 cDNA 都反轉(zhuǎn)錄成功，個(gè)別沒有條帶的需重新 RNA 或重新進(jìn)行 cDNA 的反轉(zhuǎn)錄。3 熒光定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 3-2 所示，圖 a，圖 b，圖 c，圖 d 分別是 18S、LvToll、APT 合成酶a+-K+-ATPase 對部分樣品的熒光電量 PCR 擴(kuò)增溶解曲線圖，均只有 個(gè)峰知其沒有非特異性擴(kuò)增片段。

(c) (d)圖 3-2a,b,c,d 分別為 18S、LvToll、APT 合成酶和 Na+-K+-ATPase 基因熒光定量 PCR 的溶解曲線Fig.3-2 a,b,c,d is the melting curves of quantitative PCR amplification of 18S、LvToll、APTsynthase and Na+-K+-ATPase, respectively3.4 凡納濱對蝦 3 種不同 mRNA 基因在各組織中的表達(dá)圖3-3、圖3-4、圖3-5分別顯示了三個(gè)不同基因在不同組織中的差異性表達(dá)，通過差異性表達(dá)的結(jié)果，并結(jié)合第三章生長性能的的不同，進(jìn)行綜合分析。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S917.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林惠山;戚雋淵;喬燕平;;凡納濱對蝦高產(chǎn)養(yǎng)殖水質(zhì)優(yōu)化技術(shù)探討[J];水產(chǎn)科技情報(bào);2006年04期

2 衣萌萌;于赫男;林小濤;許忠能;周小壯;;密度脅迫下凡納濱對蝦的行為與生理變化[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2012年01期

3 周歧存,丁q

本文編號(hào)：2638327