【摘要】：1.發(fā)酵豆粕替代魚粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng),免疫相關(guān)酶活及免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響近年來發(fā)酵豆粕作為魚粉替代物的研究已受到越來越多關(guān)注,但有關(guān)其影響水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)的健康及免疫機(jī)能機(jī)制尚不明確。免疫相關(guān)酶、基因與水產(chǎn)動(dòng)物健康、免疫機(jī)能密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)擬從免疫相關(guān)酶活及基因轉(zhuǎn)錄水平探討發(fā)酵豆粕替代魚粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)影響的健康及免疫機(jī)能機(jī)制。設(shè)置5種實(shí)用飼料,以30%魚粉組(FM)為對(duì)照組,分別設(shè)置用4%(FSM4)、8%(FSM8)、12%(FSM12)和16%(FSM16)的發(fā)酵豆粕,相應(yīng)替代9.7%、19.4%、29.1%和38.8%的魚粉飼料組,飼養(yǎng)體重為(7.62±0.23)g的凡納濱對(duì)蝦60天后,統(tǒng)計(jì)生長(zhǎng)性能,檢測(cè)肌肉營(yíng)養(yǎng)成分、血清及肝胰腺免疫酶活性,肝胰腺HSP70mRNA和鰓Toll受體mRNA、IMDmRNA、溶菌酶(LZM)mRNA免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平。結(jié)果表明:1)發(fā)酵豆粕替代魚粉在凡納濱對(duì)蝦成活率上與對(duì)照組相比無顯著影響(P0.05);過低和過高的發(fā)酵豆粕添加量皆會(huì)影響凡納濱對(duì)蝦的特定生長(zhǎng)率(P0.05)。2)肌肉粗蛋白含量在發(fā)酵豆粕添加組都低于對(duì)照組,除FSM12外差異不顯著(P0.05);粗脂肪含量隨著發(fā)酵豆粕添加量的升高而降低,FSM16組表現(xiàn)最低。3)免疫指標(biāo)中,FSM4和FSM16組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性顯著高于對(duì)照組(P0.05),堿性磷酸酶(ALP)活性除FSM12組外其余發(fā)酵豆粕組顯著高于對(duì)照組(P0.05),谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性分別在FSM4組和FSM8組出現(xiàn)最高值和最低值,血清總蛋白(TP)含量與肝胰腺丙二醛(MDA)含量除FSM16組外其余發(fā)酵豆粕組與對(duì)照組無顯著性差異(P0.05)。4)鰓Toll受體(TLR)mRNA隨著發(fā)酵豆粕添加量的增大有上升趨勢(shì),鰓IMDmRNA表達(dá)量隨發(fā)酵豆粕添加量的增加呈先增后減趨勢(shì),過高的添加量會(huì)降低鰓LZMmRNA表達(dá)量,而肝胰腺HSP70mRNA表達(dá)量則隨著發(fā)酵豆粕添加量的增加不斷上升。綜上所述,發(fā)酵豆粕適量替代魚粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能無明顯影響,并可提高免疫相關(guān)酶活,上調(diào)免疫相關(guān)基因的表達(dá),具有改善機(jī)體免疫機(jī)能的效果。本實(shí)驗(yàn)條件下適宜替代魚粉比例以8%-12%為宜;發(fā)酵豆粕替代魚粉過高會(huì)引起機(jī)體不同程度的應(yīng)激反應(yīng)2.大豆抗原蛋白對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng),免疫酶活及免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響設(shè)置兩組實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)一為兩種實(shí)用飼料,含24.9%的豆粕(SBM),8%的發(fā)酵豆粕和16.95%的豆粕(FSBM);實(shí)驗(yàn)2為兩種半純化飼料,為高抗原蛋白(SPD1)組和低抗原蛋白(SPD2)組,其中的抗原蛋白含量(大豆球蛋白和β球蛋白)分別與實(shí)驗(yàn)一豆粕組和發(fā)酵豆粕組相同,旨在比較發(fā)酵豆粕(FSBM)和豆粕(SBM)對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、基因表達(dá)、氧化狀態(tài)和非特異性免疫反應(yīng)的影響,及其中的抗原蛋白對(duì)凡納濱生長(zhǎng),免疫健康等影響機(jī)制。實(shí)驗(yàn)對(duì)蝦初重為7.62±0.23g,每組飼料設(shè)4平行,投喂60天。結(jié)果顯示,在實(shí)驗(yàn)一中,對(duì)蝦體增重和特定生長(zhǎng)率在兩組實(shí)用飼料組中無顯著性差異(P0.05),但在SBM組中,血清ALP、AST、ALT和肝胰腺SOD、LZM的活性顯著高于FSBM組(P0.05),而MDA的含量上無顯著差異(P0.05),而對(duì)于對(duì)蝦鰓中TLR、LZM、IMD和肝胰腺HSP70的基因表達(dá)水平上同樣SBM組顯著高于FSBM組(P0.05);實(shí)驗(yàn)二,SPD2組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于SPD1組(P0.05),免疫相關(guān)指標(biāo)中,SPD1組與SPD2組相比具有更高的ALP,ALT和LZM活性,而TLRmRNA,LZMmRNA和IMDmRNA的表達(dá)水平低于SPD2組,HSP70mRNA的表達(dá)水平SPD1組顯著高于SPD2組(P0.05)�？偨Y(jié),在凡納濱對(duì)蝦飼料中,豆粕比發(fā)酵豆粕更有可能誘發(fā)非特異性免疫反應(yīng)和氧化應(yīng)激。豆粕中的抗原蛋白是降低對(duì)蝦的免疫力,損害肝臟腺健康的主要原因。3.發(fā)酵豆粕替代魚粉時(shí)添加不同水平晶體精氨酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗應(yīng)激能力的免疫調(diào)控發(fā)酵豆粕作為魚粉替代物已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料中,但在替代時(shí)會(huì)出現(xiàn)氨基酸平衡性問題,精氨酸作為一種必需氨基酸,在水產(chǎn)動(dòng)物的新陳代謝中起著重要的作用,為了探討發(fā)酵豆粕替代魚粉時(shí)精氨酸的重要性,本實(shí)驗(yàn)以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象(初重0.62±0.1g),在以魚粉(22.5%)和發(fā)酵豆粕(10%)為主要蛋白源,精氨酸含量為1.98%的基礎(chǔ)飼料中,分別添加0,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%的晶體精氨酸。養(yǎng)殖60天后,統(tǒng)計(jì)對(duì)蝦生長(zhǎng)情況,檢測(cè)體成分,肝胰腺氧化、血清免疫指標(biāo)和基因表達(dá)水平,并進(jìn)行耐低氧和抗弧菌實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:5組飼料在對(duì)蝦成活率上無顯著性差異(P0.05),0.2%組和0.8%組增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于其它組(P0.05)。血清MDA各組間無顯著性差異(P0.05),血清AST、ALT活性在0.2%組最高,0.8%組最低且與其他組差異顯著(P0.05);肝胰腺M(fèi)DA含量在0.2%組最低。耐低氧和抗弧菌能力皆在0.2%組出現(xiàn)最高值,其次為0.8%組。檢測(cè)低(0.0%)中(0.4%)高(0.8%)水平相關(guān)基因表達(dá)量發(fā)現(xiàn)0.4%添加組在IMD、LZM、MyD88基因表達(dá)上皆為最低(P0.05),ATF4基因在0.0%組表達(dá)量最高且顯著高于另兩組(P0.05)。綜合生長(zhǎng)、肝胰腺健康、抗應(yīng)激能力和基因表達(dá)水平,在魚粉用量為22.5%,發(fā)酵豆粕用量為10%時(shí),添加0.4%的晶體精基酸能有效調(diào)控凡納濱對(duì)蝦的免疫系統(tǒng),增強(qiáng)機(jī)體的抗應(yīng)激能力,保護(hù)肝胰腺健康,降低肝胰腺氧化應(yīng)激且不影響對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能。4.發(fā)酵豆粕替代魚粉時(shí)添加不同水平晶體蛋氨酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和抗應(yīng)激能力的免疫調(diào)控發(fā)酵豆粕作為魚粉替代物已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物當(dāng)中,但在替代時(shí)會(huì)出現(xiàn)氨基酸平衡性問題。蛋氨酸作為常見的第一限制性氨基酸,在魚粉替代時(shí)的添加顯得比其他必需氨基酸更為重要。為此,本實(shí)驗(yàn)以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象(初重0.62±0.1g),在前期研究的基礎(chǔ)上,以含有22.5%魚粉和10%發(fā)酵豆粕為主要蛋白源,蛋氨酸含量為0.81%的飼料作為基礎(chǔ)飼料,配制5組不同晶體蛋氨酸添加量(0.00%,0.12%,0.24%,0.36%,0.48%)的飼料,養(yǎng)殖60天探討其對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、血清和肝胰腺指標(biāo)、相關(guān)基因表達(dá)水平、耐低氧和抗弧菌能力的影響。結(jié)果顯示:5組飼料在對(duì)蝦成活率,增重率和特定生長(zhǎng)率上無顯著性差異(P0.05)。血清MDA五組之間無顯著性差異(P0.05),血清AST,ALT活性在0.00%和0.48%組顯著高于其他組(P0.05);肝胰腺M(fèi)DA含量在0.24%組最低。耐低氧能力,0.00%組顯著高于其他組,抗弧菌能力在0.12%和0.24%組出現(xiàn)最高值,選取了低(0.00%)、中(0.24%)、高(0.48%)三種水平蛋氨酸飼料組進(jìn)行對(duì)蝦基因表達(dá)量的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)0.24%組TLR基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組,IMD基因0.00%組顯著低于另兩組,LZM基因表達(dá)量隨著蛋氨酸量增加而降低,ATF4基因0.00%組顯著高于0.24%組,綜上可知,在魚粉用量為22.5%,發(fā)酵豆粕用量為10%時(shí),添加0.24%的晶體蛋基酸能更有效,增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦抗弧菌能力,降低對(duì)蝦肝胰腺氧化程度,保護(hù)肝胰腺健康,且不影響其生長(zhǎng)性能。
【圖文】：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文導(dǎo)致水質(zhì)環(huán)境的污染進(jìn)一步嚴(yán)重，水產(chǎn)品安全問題也隨之而出[2-5]，科主要從對(duì)蝦飼料配方的優(yōu)化來提高對(duì)蝦免疫抗病力以解決對(duì)蝦病害爆發(fā)用等問題[6-9]。

主要從對(duì)蝦飼料配方的優(yōu)化來提高對(duì)蝦免疫抗病力以解決對(duì)蝦病害爆用等問題[6-9]。圖 1-1.近幾年我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量Fig1-1.The production of shrimp aquaculture in China in recent years.
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S968.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2626770