發(fā)布時間：2020-04-12 21:25

【摘要】：草魚(Ctenopharyngodon idella)是我國大宗淡水魚類養(yǎng)殖品種。但草魚病害頻發(fā),其中以草魚呼腸孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)感染導致的出血病最為突出,嚴重制約了草魚養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展�；隰~類母源免疫和以黃芪多糖促進草魚免疫能力提高的研究基礎。為探究GCRV弱毒疫苗和黃芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)免疫草魚母本所產(chǎn)子代3種免疫因子:免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、補體分子3(complement 3,C3)、溶菌酶(lysozyme,LSZ)的表達特性,解析免疫因子在草魚代間的傳遞效率。本實驗采用ELISA、RT-qPCR等方法檢測分析了產(chǎn)前40 d草魚母本經(jīng)接種草魚出血病弱毒疫苗和飼喂黃芪多糖免疫后(以下簡稱疫苗免疫組和APS免疫組)母本血液、子代胚胎和幼魚期發(fā)育各階段中三種免疫因子的蛋白活性及基因表達水平;并測定了2月齡魚種的健康免疫組織和人工感染GCRV后免疫組織中3種免疫因子的基因表達水平以及抵抗GCRV感染的免疫保護作用。結(jié)果顯示:GCRV弱毒疫苗免疫草魚母本血液中3種免疫因子蛋白活性和基因表達量均顯著高于對照組,疫苗免疫組IgM、C3和LSZ蛋白活性依次為對照組的2.5倍、1.9倍和3.0倍,mRNA水平為對照組的2.5倍、2.2倍和3.0倍;APS免疫組草魚母本血液中IgM、C3和LSZ的蛋白活性均顯著高于對照組,分別提高了2.6倍、1.6倍和2.0倍,APS組IgM mRNA水平高于對照組,但無顯著差異,而C3和LSZ的mRNA分別為對照組1.9倍、2.6倍。草魚兩種母源免疫方式所得的胚胎和魚苗發(fā)育階段中,3種免疫因子蛋白活性呈先下降后升高的趨勢,其中IgM蛋白在早期發(fā)育各階段均顯著高于對照組。疫苗和APS免疫組的C3、LSZ活性僅在胚胎和魚苗孵化早期與對照組有顯著差異。3個組之中IgM基因的表達水平在發(fā)育早期呈先下降后上升的趨勢,卵子中,疫苗和APS免疫組IgM基因的表達量分別為對照組的2.6倍和2.4倍,12 h胚胎至5 d仔魚均未檢測到IgM基因表達,14 d仔魚階段IgM基因重新開始表達,但無顯著差異。C3基因在3個處理組中從3至12 h胚胎期未檢測到表達。LSZ基因在3個處理組的卵子至6 h(原腸胚期)呈快速下降趨勢,且疫苗免疫組與對照組具有顯著差異,而APS免疫組只在卵子和受精卵中與對照組有顯著差異。檢測2月齡魚種健康免疫組織IgM、LSZ和C3 mRNA的結(jié)果顯示,疫苗免疫組子代IgM在免疫組織脾臟、體腎和頭腎中與對照組有顯著差異,而APS免疫組IgM只在頭腎中與對照組具有顯著差異。3個組在各免疫組織中C3和LSZ表達無顯著差異。GCRV攻毒后,疫苗和APS免疫組2月齡草魚在脾臟中IgM基因的表達水平呈先上升后下降的趨勢。3個組IgM mRNA在72 h表達均達到峰值,疫苗和APS免疫組均為對照組的2.8倍。頭腎中24 h表達均達到峰值,疫苗免疫組和APS免疫分別為對照組的4.2倍和4.5倍。疫苗和APS免疫組C3 mRNA水平在脾臟和頭腎各時間點均高于對照組,但無顯著差異。疫苗免疫組LSZ mRNA在脾臟和頭腎與對照組無顯著差異,而APS免疫組LSZ mRNA在脾臟和頭腎只有0-12h與對照組具有顯著差異。GCRV攻毒后,疫苗和APS免疫組子代,出現(xiàn)感染癥狀晚于對照組,死亡率低于對照組。研究表明,母源免疫可增強免疫因子在草魚代間傳遞能力,并對子代在應對GCRV感染時發(fā)揮一定免疫保護作用。
【圖文】：

3.1 草魚母本血液中 3 種免疫因子的蛋白活性與基因表達水平對疫苗免疫組、APS 免疫組和對照組草魚母本血液中 3 種免疫因子蛋白活性和基因表達水平進行了檢測（圖 1）。在草魚母本血液中，疫苗免疫組 IgM、C3 和 LSZ 的蛋白活性均顯著高于對照組（P<0.05），分別是對照組的 2.5 倍、1.9 倍和 3.0 倍。AP免疫組 IgM、C3 和 LSZ 的蛋白活性和對照組相比，也均具有顯著差異（P<0.05），是對照組的 2.6 倍、1.6 倍和 2.0 倍。疫苗免疫組和 APS 免疫組的 IgM 活性在草魚母本血液中無顯著差異，而疫苗免疫組 C3 和 LSZ 的活性水平均高于 APS 免疫組，且具有顯著差異（P<0.05）（圖 1-a）。在草魚母本血液中，疫苗免疫組 IgM、C3 和 LSZ mRNA 表達水平均顯著高于對照組（P<0.05），分別提高了 2.5 倍、2.2 倍和 3.0 倍。APS 免疫組母本血液中 IgM mRNA水平高于對照組，但與對照組無顯著差異，而 C3 和 LSZ 的 mRNA 的表達水平與對照組相比，均表現(xiàn)出顯著差異（P<0.05），分別是對照組的 1.9 倍、2.6 倍。疫苗免疫組和APS 免疫組在 3 種免疫因子的 mRNA 表達水平只有 IgM mRNA 水平具有顯著差異（P<0.05），而 C3 和 LSZ 的 mRNA 表達水平無顯著差異（圖 1-b）。

圖 2 2 月齡草魚 IgM、C3 和 LSZ 基因在免疫組織中相對表達水平1. 體腎; 2. 頭腎; 3. 脾臟;各免疫因子種不同小寫字母者表示顯著性差異(P<0.05).n=3; mean±SD.Fig.2 Expression of IgM, C3 and LSZ genes in immune tissues of two months Ctenopharyngodon idella1. trunk kidney; 2. head kidney; 3. spleen;Each of the immune factors values with different small letter superscripts mean significant differences (P<0.05).n=3;mean±SD.3.5 2 月齡草魚 GCRV 攻毒后 IgM、LSZ 和 C3 基因在不同組織的表達經(jīng)人工感染 GCRV 后，對 2 月齡草魚疫苗免疫組、APS 免疫組和對照組中脾臟和頭腎中 3 種基因表達水平進行了檢測。疫苗免疫組和 APS 免疫組在脾臟中 IgM mRNA的表達水平呈先上升后下降的趨勢，而對照組呈先下降后上升再下降趨勢。疫苗免疫組在 12 至 72 h 顯著高于對照組（P<0.05），而 APS 免疫組在 GCRV 感染 24h 后才與對照組具有顯著差異（P<0.05），72 h 3 個組 IgM 基因表達均達到峰值，疫苗免疫組為對照組的 2.8 倍，，APS 免疫組也為對照組的 2.8 倍，而后表達水平有所下降，但疫苗免疫組和 APS 免疫組仍與對照組具有顯著差異（P<0.05），且疫苗免疫組在 24 h、48 h
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S943

【參考文獻】

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本文編號：2625186